螺桿菌與原發(fā)性肝細胞癌相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討人類肝癌的發(fā)生是否與螺桿菌有關(guān)。 方法：1、取80對新鮮的肝癌及癌旁組織標本，進行螺桿菌培養(yǎng)和組織PCR檢測，PCR引物為兩對螺桿菌屬特異的16S—RNA引物，采用巢式PCR方法：用細菌16SrRNA的通用引物16SEUbac作PCR第一輪擴增，螺桿菌特異性引物Helicospecles作PCR第二輪擴增。對螺桿菌16SrRNA基因陽性的選取PCR擴增產(chǎn)物較多的50份樣品回收后進行測序分析；并用幽門螺桿菌(Hp，丘py

2、lori)的特異基因(26KDa蛋白)和相關(guān)功能基因(cagA、vacA、rps4、glmM)來驗證是否為該菌；正常肝組織取白3例肝血管瘤標本和10例正常肝組織的新鮮標本；2、以兔抗№抗體通過免疫組化技術(shù)，檢測80對肝癌及癌旁組織標本；3、選取PCR及免疫組化都陽性的標本6份，用透射電鏡觀察肝癌及癌旁組織標本中是否有幽門螺桿菌存在。 結(jié)果：1、未能從組織標本中培養(yǎng)出螺桿菌。2、80份癌組織標本中39份癌組織檢出螺桿菌基因，陽性率

3、為48．75％，80份癌旁組織標本中38份癌旁組織檢出螺桿菌基因，陽性率為47．5％。50份螺桿菌16SrRNA基因PCR擴增產(chǎn)物較強的標本經(jīng)測序鑒定，與幽門螺桿菌有99％以上的同源性。正常肝組未檢出螺桿菌屬基因，陽性率為O．O％，與癌組織和癌旁組織差異有統(tǒng)計學意義(P

4、螺桿菌16SrRNA基因PCR擴增產(chǎn)物較強的標本中有8份cagA基因陽性(16％)；37份26KDa基因陽性(74％)；9份glmM基因陽性(18％)；未能擴增出vacA基因以及rps4基因。4、80份癌組織標本中26份癌組織檢出膨pylori，陽性率為32．5％；24份癌旁組織免疫組化檢出丘pylori，陽性率為30．0％。正常肝組中未觀察到幽門螺桿菌的存在，陽性率為0．0％，與癌組織和癌旁組織差異有統(tǒng)計學意義(P<0．01)。5、透