VDBP單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性肝癌是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中約54％發(fā)生在中國(guó)，我國(guó)每年有37萬(wàn)人死于肝癌，居所有惡性腫瘤死亡的第二位。由于原發(fā)性肝癌在人群中的高普遍性和高危害性，對(duì)原發(fā)性肝癌的發(fā)生和發(fā)展及其防治方面的研究一直是國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。目前原發(fā)性肝癌的確切發(fā)病及發(fā)展惡化的機(jī)制尚不清楚，但近代細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究表明，腫瘤的發(fā)展是多基因、多階段的復(fù)雜過(guò)程。隨著分子生物學(xué)理論與技術(shù)的發(fā)展，遺傳因素被證實(shí)與肝細(xì)胞癌有著密切關(guān)系

2、。
　　在基因組中，最普遍的變異就是單個(gè)堿基的差異，可以分為轉(zhuǎn)換與顛換、單堿基的插入與缺失等不同類型。對(duì)于其中發(fā)生率大于1％的變異被稱作單核苷酸多態(tài)性（single uncleotide polymorphism，SNP）。近年來(lái)，美國(guó)國(guó)立人類基因組研究院與SNP研究委員會(huì)(The SNP Consortium，TSC)發(fā)起的對(duì)SNP的大規(guī)模實(shí)驗(yàn)研究表明，單核苷酸變異能夠?yàn)檠芯慷嗷驈?fù)雜疾病及個(gè)體間患病風(fēng)險(xiǎn)及藥物反應(yīng)的不同提供新方

3、法。人類所有群體中存在的SNP位點(diǎn)約1500萬(wàn)個(gè)，平均每300～600bp存在一個(gè)基因突變。這些SNP可能是直接影響某些疾病如腫瘤、哮喘、心臟病的易感性基因位點(diǎn)。而如何使用SNP多態(tài)信息探索各種惡性腫瘤的的遺傳機(jī)制及在臨床上的應(yīng)用已經(jīng)成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。
　　維生素D結(jié)合蛋白(vitamin D-binding protein，VDBP或Gc-globulin)是一種相對(duì)分子量為51000～58000的多功能血漿球蛋白，主要

4、合成于肝臟，和ALB、AFP、AFM一樣，是屬于白蛋白超家族中的一種結(jié)合蛋白，大部分為游離態(tài)的天然蛋白形式。近年來(lái)，人們?cè)谂R床實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)VDBP與乳腺癌及前列腺癌、結(jié)腸癌等的發(fā)生均具有一定相關(guān)性。JakobAlbrethsen在對(duì)小鼠的肝癌組織中部分蛋白的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)VDBP在小鼠的肝癌組織中表達(dá)明顯增高，但在癌前病變中表達(dá)量較低，其基因多態(tài)性可能與肝癌的關(guān)系在腫瘤防治中具有重要的意義。目前有關(guān)VDBP基因突變和人類原發(fā)性肝癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

5、的報(bào)道較少且結(jié)果不一，應(yīng)進(jìn)行深入研究。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者VDBP Glu416Asp(rs7041)、Thr420Lys(rs4588)位點(diǎn)的多態(tài)性，并考察伴有腫瘤血清學(xué)標(biāo)志物、相關(guān)臨床參數(shù)的影響。為探討VDBP多態(tài)性和原發(fā)性肝癌患者發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1、本研究采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例-對(duì)照研究方法。病例為2007年1月至2010年12月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院進(jìn)行住院治療，

6、臨床診斷明確，未經(jīng)放射和抗癌藥物治療的149例年齡為31～85歲的肝癌新發(fā)病例;對(duì)照組為同期在同一醫(yī)院體檢中心進(jìn)行健康體檢且體檢結(jié)果正常、無(wú)腫瘤病史及遺傳病史且年齡與病例組相匹配的246例健康人群。在隨機(jī)血液樣品標(biāo)本的同時(shí)，收集每個(gè)研究對(duì)象的人口學(xué)資料集臨床相關(guān)參數(shù)。
　　2、采用酚氯仿法從抗凝血中提取基因組DNA，接下來(lái)通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)-實(shí)時(shí)熒光定量的方法，檢測(cè)VDBP Glu416Asp、Thr420Lys位點(diǎn)基因型。

7、　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件包SPSS19.0計(jì)算。采用卡方檢驗(yàn)比較基因型的組間分布頻率，分析不同基因型與原發(fā)性肝癌的相關(guān)性。采用非條件logistic回歸分析計(jì)算比值比(odds ratios，OR)和95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)，分析不同基因型與原發(fā)性肝癌風(fēng)險(xiǎn)和臨床病例特征之間的相關(guān)性。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、rs7

8、041位點(diǎn)在肝癌組中基因型分布如下:基因型Asp/Asp為60人，基因型Asp/Glu為70人，基因型Glu/Glu為19人，分別占40.3％、47.0％、12.8％;在對(duì)照組中基因型分布如下:基因型Asp/Asp為112人，基因型Asp/Glu為103人，基因型Glu/Glu為31人，分別占45.5％、41.9％、12.6％。經(jīng)卡方檢驗(yàn)證實(shí)rs7041多態(tài)位點(diǎn)在對(duì)照組中基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡遺傳平衡定律(P

9、＞0.05)。rs4588位點(diǎn)在肝癌組中基因型分布如下:基因型Thr/Thr為85人，基因型Thr/Lys為58人，基因型Lys/Lys為6人，分別占57.0％、38.9％、4.0％;在對(duì)照組中基因型分布如下:基因型Thr/Thr為125人，基因型Thr/Lys為104人，基因型Lys/Lys為17人，分別占50.8％、42.3％、6.9％。
　　2、經(jīng)Logistic回歸分析我們發(fā)現(xiàn)以rs7041基因型Asp/Asp為參照，基因

10、型Asp/Glu個(gè)體的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)未見(jiàn)增高(OR=1.144，95％CI:0.596-2.195，P=0.686)，在基因型Glu/Glu中末見(jiàn)明確相關(guān)性（OR=1.26995％CI:0.820-1.963，P=0.285）。此外，rs4588多態(tài)基因型和肝癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也未見(jiàn)相關(guān)性，與攜帶基因型Thr/Thr個(gè)體相比較，攜帶基因型Thr/Lys個(gè)體與肝細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)未見(jiàn)明顯差異（OR=0.519，95％CI:0.197-1.370，P=0.

11、185），攜帶基因型Lys/Lys個(gè)體與肝細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)未見(jiàn)明顯差異(OR=0.820，95％CI:0.537-1.252，P=0.358)。
　　3、本研究的臨床參數(shù)包括血清AFP水平、肝炎標(biāo)志物(B、C、B+C、NBNC)、肝硬化、ECOG評(píng)分、腫瘤大小(≤5 cm、＞5 cm、diffuse)、Child-pugh(A、B)分級(jí)等信息，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后，rs7041位點(diǎn)和腫瘤大小具有一定相關(guān)性(P=0.031)。其余臨床參數(shù)和