OsCH2和OsHSP82基因過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建和水稻遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、我國(guó)的主要農(nóng)作物水稻每年因高溫?zé)岷Χ斐删薮蟮臏p產(chǎn)。水稻耐熱相關(guān)基因的功能鑒定和調(diào)控研究對(duì)闡明耐熱機(jī)制，通過(guò)基因工程手段改進(jìn)水稻作物的耐熱性具有十分重要的意義。 葉黃素可破壞高溫產(chǎn)生的“活性氧”提高植物的耐熱性，高溫?zé)峒は庐a(chǎn)生的熱激蛋白也可提高植物的耐熱力。因此通過(guò)構(gòu)建水稻β-胡蘿卜素羥化酶基因OsCH2和熱激蛋白基因OsHSP82過(guò)表達(dá)載體，進(jìn)而對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻耐熱性進(jìn)行鑒定，可望確定其功能及獲得水稻耐熱新材料。 以擬南芥

2、β-胡蘿卜羥化酶和熱激蛋白基因的序列，從Tigr Rice Genome Annotation檢索到與抗旱耐熱功能相關(guān)的水稻B一胡蘿卜素羥化酶基因3個(gè)和熱激蛋白基因53個(gè)，從中各選取一個(gè)基因作該研究用。這兩個(gè)基因的Locus Name分別為L(zhǎng)OC Os04g48880和LOC_Os09g30418。從全長(zhǎng)cDNA數(shù)據(jù)庫(kù)獲得了對(duì)應(yīng)的全長(zhǎng)cDNA，登錄號(hào)分別為AK060559和AK061896，各命名為OsCH2和OsHSP820水稻OsC

3、H2蛋白與玉米、龍膽草、阿拉比卡咖啡豆、番茄、甜橙、番紅花蛋白同源性分別為85％、57％、57％、60％、58％和61％，OsHSP82蛋白與小麥、大麥、煙草、番茄和擬南芥蛋白同源性分別為95％、94％、90％、90％和89％。水稻OsCH2蛋白存在2個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域，在C端存在一個(gè)β-胡蘿卜素羥化酶功能域，還存在一個(gè)與脂質(zhì)體代謝有關(guān)的固醇去飽和酶保守區(qū)。水稻OsHSP82蛋白無(wú)跨膜結(jié)構(gòu)域，在N末端存在一個(gè)組氨酸蛋白激酶功能域，還存在一

4、個(gè)HSP90結(jié)構(gòu)域。 從Rice Genome Resource Center索取到含全長(zhǎng)cDNA的質(zhì)粒AK060559和AK061896，并根據(jù)水稻OsCH2和水稻OsHSP82全長(zhǎng)cDNA基因序列設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增水稻OsCH2和水稻OsHSP82全長(zhǎng)cDNA片段并將其克隆到植物表達(dá)載體pCAMB工A-1300-multi中，置于CaMv35S啟動(dòng)子下游，使其目的基因能夠過(guò)分表達(dá)。對(duì)重組子進(jìn)行PCR和酶切鑒定，獲得正確的水稻β-