SUSIBA2正反義表達載體的構建及其對水稻的遺傳轉化.pdf

1、淀粉是高等植物中碳水化合物的主要貯藏形式，也是糧食作物產品的最主要成分。在植物中，與淀粉生物合成直接相關的酶有：1，6-二磷酸腺苷葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose Gyrophosphorylase，AGPase)、可溶性淀粉合成酶(solublestarch synthase，SSS)、顆粒性淀粉合成酶酶(granule-bound starch synthase，GBSS)、淀粉分支酶(Starch branching en

2、zyme，SBE)、淀粉去分支酶(debranching enzyme，DBE)。 近年來的研究表明：許多淀粉合成酶基因的表達是受到糖信號的誘導。本研究的SUSIBA2(sugar signaling in barley)基因是瑞典農業(yè)大學Christer教授實驗室從大麥中分離出來的，它是結合在異淀粉酶與淀粉分支酶啟動子的糖應答元件上作為激活因子，在大麥胚乳淀粉累積過程中起重要的調控作用。本研究通過構建SUSIBA2基因的正義及

3、反義表達載體，并通過農桿菌介導法，將其基因導入水稻日本晴的基因組中，獲得轉基因水稻植株。以期該基因在水稻中發(fā)揮調節(jié)有關淀粉酶活性的作用，最終使其淀粉組成發(fā)生變化。主要研究結果如下： 1、用BgⅢ單酶雙切從pS1473的載體上切下目的基因SUSIBA2，用BamHI單酶切開pTCK303載體，將目的基因連接到載體上，成功地構建了SUSIBA2基因的正義及反義表達載體pTCK303-SUSIBA2(+)和pTCK303-SUSIBA

4、2(-)。 2、利用凍融法將構建好的植物表達載體pTCK303-SLISIBA2(+)和pTCK303-SUSIBA2(-)成功導入農桿菌LBA4404中，得到既抗Rif(利福平霉素)，又抗Kan(卡那霉素)的農桿菌菌落。 3、通過農桿菌介導的方法，將SUJSIBA2基因導入水稻基因組中，共獲得了6株抗性植株，其中4株為正義表達植株，2株為反義表達植株。 4、PCR結果表明，4株正義表達植株全部為陽性植株，而2株