血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病內(nèi)皮依賴性血管舒張功能的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一章糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型的建立
　　 目的：探討利用多次皮下注射胰島素方法建立糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型，并初步觀察血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病慢性并發(fā)癥的影響。
　　 方法：取75只SD大鼠隨機(jī)分成正常組(n＝20)和模型組(n＝55)，高糖高脂飼料喂養(yǎng)模型組SD大鼠4周后用小劑量鏈尿佐菌素(STZ)35mg/Kg腹腔注射誘導(dǎo)建立糖尿病模型，模型成功后將其隨機(jī)分成持續(xù)高血糖組和血糖波動(dòng)組。血糖波動(dòng)組大鼠每日2次皮下注射胰島素誘導(dǎo)血

2、糖波動(dòng)，建立糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型。觀察各組大鼠存活率、體重、飲水量、尿量情況及檢測(cè)血糖值、胰島素、HbA1C，腎功能與24小時(shí)尿蛋白、血脂等生化指標(biāo)變化。
　　 結(jié)果：1.持續(xù)高血糖組，血糖波動(dòng)組較正常組大鼠存活率、體重顯著下降，飲水量和尿量顯著增多(P＜0.05)，而持續(xù)組與波動(dòng)組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 2.與正常組相比，糖尿病模型組大鼠空腹血糖、血清胰島素均顯著升高，胰島素敏感性指數(shù)下降(P＜0.05)

3、。
　　 3.持續(xù)高血糖組與血糖波動(dòng)組大鼠的平均血糖水平(MBG)、每日平均血糖的標(biāo)準(zhǔn)差(SDBG)與每日最大血糖波動(dòng)幅度(LAGE)及M值較正常組均顯著增高(P＜0.05)，血糖波動(dòng)組的SDBG，LAGE及M值顯著高于持續(xù)高血糖組，持續(xù)高血糖組的MBG顯著高于血糖波動(dòng)組(P＜0.05)。
　　 4.與正常組比較，血糖波動(dòng)組和持續(xù)高血糖組大鼠的24小時(shí)尿蛋白，血清BUN、Cr顯著增高(P＜0.05)，且波動(dòng)組較持續(xù)組上述

4、指標(biāo)顯著增高(P＜0.05)。
　　 5.與正常組比較，血糖波動(dòng)組和持續(xù)高血組大鼠HbA1c顯著增高(P＜0.05)，且波動(dòng)組與持續(xù)組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。持續(xù)組、波動(dòng)組與正常組比較，血脂指標(biāo)TC、TG、LDL顯著升高(P＜0.05)，HDL顯著下降(P＜0.05)，持續(xù)組和波動(dòng)組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：使用每日皮下注射兩次胰島素的方法能成功制作出糖尿病大鼠血糖波動(dòng)模型，并可作為研究血糖波

5、動(dòng)及其并發(fā)癥的動(dòng)物模型。HbA1C相似的糖尿病大鼠，血糖波動(dòng)可能加重其糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。
　　 第二章血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮依賴性舒張功能的影響及機(jī)制研究
　　 目的：觀察血糖波動(dòng)對(duì)糖尿病大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能(EDVR)和一氧化氮(NO)含量、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性和表達(dá)及磷脂酰肌醇－3激酶(PI3K)、蛋白激酶B（PKB，亦稱Akt）表達(dá)的影響。
　　 方法：觀察各組大鼠離體主動(dòng)

6、脈對(duì)乙酰膽堿(Ach)依賴性血管舒張反應(yīng)，Griess重氮化反應(yīng)法檢測(cè)主動(dòng)脈NO含量，免疫組化SP法檢測(cè)eNOS活性，透射電鏡檢測(cè)主動(dòng)脈超微結(jié)構(gòu)的變化，RT-PCR及western blot方法檢測(cè)PI3K、PKB、eNOS mRNA及蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1.持續(xù)高血糖組與血糖波動(dòng)組大鼠胸主動(dòng)脈對(duì)各濃度點(diǎn)乙酰膽堿誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張功能(EDVR)較正常對(duì)照組均顯著下降(P＜0.01)，而波動(dòng)組上述指標(biāo)又低于持續(xù)組(P＜0

7、.05)。持續(xù)組與波動(dòng)組大鼠主動(dòng)脈NO濃度均較正常組顯著下降(P＜0.05)，且波動(dòng)組較持續(xù)組下降(P＜0.05)。
　　 2.持續(xù)高血糖組與血糖波動(dòng)組糖尿病大鼠主動(dòng)脈透射電鏡檢查可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮下結(jié)構(gòu)的病理改變。血糖波動(dòng)組較持續(xù)高糖組病理改變更加嚴(yán)重。
　　 3.正常組大鼠主動(dòng)脈eNOS陽(yáng)性表達(dá)主要出現(xiàn)在血管內(nèi)膜區(qū)（主要是內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)），持續(xù)組和波動(dòng)組主動(dòng)脈eNOS陽(yáng)性表達(dá)較正常組顯著下降(P＜0.05)。
　

8、　 4.血糖波動(dòng)組與持續(xù)高血糖組PI3KmRNA與PI3K-P85蛋白，PKB、eNOS磷酸化蛋白相對(duì)光密度值較正常組均顯著低，且波動(dòng)組較持續(xù)組顯著下降(P＜0.05)；波動(dòng)組，持續(xù)組大鼠主動(dòng)脈PKB、eNOSmRNA及PKB、eNOS總蛋白相對(duì)光密度值與正常組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)
　　 結(jié)論：長(zhǎng)期血糖波動(dòng)可以加重糖尿病大鼠血管內(nèi)皮依賴性舒張功能的損傷及內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)破壞，可能通過(guò)抑制糖尿病大鼠主動(dòng)脈PI3K/Ak

9、t/eNOS信號(hào)通路的活化，減少內(nèi)皮舒張因子NO的合成，從而加重糖尿病大血管病變。
　　 第三章波動(dòng)性高糖對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞合成舒張因子NO的影響及機(jī)制研究
　　 目的：觀察波動(dòng)性高糖培養(yǎng)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)合成舒張因子一氧化氮(NO)濃度和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(PKB)表達(dá)的影響，探討血糖波動(dòng)影響內(nèi)皮功能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　 方法：波動(dòng)性高濃度

10、葡萄糖（5.5或20mmol/L）與恒定性高濃度葡萄糖(20mmol/L)作用于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)7天，檢測(cè)上清液NO濃度及Western blot方法檢測(cè)磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB/Akt)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及磷酸化蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1.波動(dòng)性高糖組，持續(xù)性高糖組HUVCE上清液中NO濃度較正常組顯著降低(P＜0.05)，而波動(dòng)性高糖組顯著低于持續(xù)性高糖組(P

11、＜0.05)。
　　 2.波動(dòng)性高糖組與持續(xù)性高糖組PI3K-P85蛋白相對(duì)光密度值較正常組顯著下降(P＜0.05)，且波動(dòng)組較持續(xù)組下降更顯著(P＜0.05)。波動(dòng)性高糖組，持續(xù)性高糖組Akt，eNOS總蛋白相對(duì)光密度值較正常組無(wú)顯著差異。波動(dòng)性高糖組，持續(xù)性高糖組Akt，eNOS磷酸化蛋白相對(duì)光密度值較正常組顯著降低(P＜0.05)，而波動(dòng)組上述指標(biāo)又低于持續(xù)組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：波動(dòng)性高糖較持續(xù)性高糖對(duì)