線粒體ATP敏感鉀通道對高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的:探討線粒體ATP敏感鉀通道(mitochondrial ATP-sensitivepotassium channel,mitoKATP)對高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。
　　 方法:以人肺泡上皮A549細(xì)胞為研究對象,體外傳代培養(yǎng)A549細(xì)胞系。以3L／min的900ml／L氧氣和50ml／L二氧化碳高純混合氣作為攻擊因素處理A549細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)將A549細(xì)胞共分為三組:對照組(n=8)、高氧組(n=8),二氮嗪組(

2、n=8)。對照組:加入含100mL／L胎牛血清培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)；高氧組:加入等量含100mL／L胎牛血清培養(yǎng)液,換液后,通入3L／min的90％氧氣和5％二氧化碳高純混合氣10min,密閉培養(yǎng)；二氮嗪組:用終濃度為100μmol／L的等量二氮嗪培養(yǎng)液預(yù)處理24h后,再用高氧誘導(dǎo)A549細(xì)胞,密閉培養(yǎng)12、24、48h收集細(xì)胞指標(biāo)檢測如下指標(biāo):倒置相差顯微鏡下觀察A-549細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變并照相；CCK-8法檢測A549細(xì)胞活力；流式細(xì)胞儀

3、檢測細(xì)胞凋亡；免疫組化法檢測細(xì)胞內(nèi)Omi／HtrA2的表達(dá)；激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位變化；透射電鏡法檢測細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果:(1)倒置顯微鏡下:對照組細(xì)胞貼壁良好,呈鋪路石樣,為扁圓的多角形,細(xì)胞排列緊密,連接成片,數(shù)量多,懸浮細(xì)胞少,分裂相多。高氧組細(xì)胞受損明顯,形態(tài)改變,由典型的扁圓多角形細(xì)胞變?yōu)閳A形或橢圓形,細(xì)胞間空隙加大,連接松散,活細(xì)胞數(shù)量明顯降低,懸浮細(xì)胞明顯增多；二氮嗪組細(xì)胞損傷狀況明顯得到改

4、善,細(xì)胞生長狀況明顯好轉(zhuǎn),形態(tài)明顯變好,較高氧組活細(xì)胞數(shù)量增加,懸浮細(xì)胞數(shù)減少,但未恢復(fù)到對照組水平；(2)與對照組(0.34±0.03)比,高氧組細(xì)胞活力(0.13±0.02)下降(P<0.01)；與高氧組相比,二氮嗪組細(xì)胞活力(0.21±0.04)增加,但未恢復(fù)至對照組水平(P<0.01)；(3)與對照組(0.40％±0.10％)比,高氧組凋亡率(6.54％±0.48％)明顯增加(P<0.01)；與高氧組相比,二氮嗪組凋亡率(2.3

5、6％±0.51％)明顯降低,差異有顯著性(p<0.01)。(4)與對照組(15.26±2.80)相比,高氧組A549細(xì)胞內(nèi)Omi／HtrA2的表達(dá)(44.94±4.47)明顯增加,差異有顯著性(P<1.01)；與高氧組相比,二氮嗪組Omi／HtrA2的表達(dá)(28.22±1.07)明顯降低,差異有顯著性(P<0.01)；(5)激光共聚焦顯微鏡下:與對照組(1.92±0.11)相比,高氧組細(xì)胞線粒體膜紅／綠熒光強(qiáng)度比值(1.00±0.08)

6、明顯降低,差異有顯著性(P<0.01)；與高氧組相比,二氮嗪組A549細(xì)胞線粒體膜紅／綠熒光強(qiáng)度比值(1.57±0.08)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(6)對照組A549細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,胞核呈橢圓形,胞漿內(nèi)可見大量多泡體,線粒體結(jié)構(gòu)清晰,未見腫脹；高氧組胞核圓形,核仁明顯,大量線粒體腫脹,電子密度減低,嵴減少；二氮嗪組可見細(xì)胞胞核小,圓形,胞質(zhì)電子密度較高,線粒體呈空泡狀,線粒體嵴減少。
　　 結(jié)論:二氮嗪可能通過穩(wěn)定