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1、目的 構(gòu)建干擾非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)的四種質(zhì)粒，通過(guò)抑制表皮生長(zhǎng)因子受體在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株內(nèi)的表達(dá)，觀察RNA干擾技術(shù)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)的抑制率，探索肺癌等惡性腫瘤治療的新途徑。 方法 1．根據(jù)RNA干擾的原理，構(gòu)建針對(duì)人類表皮生長(zhǎng)因子受體的四種質(zhì)粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、pSilencer-EGFRⅢ和 pSilencer-EGFRⅣ；
2、2．將構(gòu)建的四種質(zhì)粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、psilencer-EGFRⅢ、pSilencer-EGFRIV以及psilencer-control分別轉(zhuǎn)染非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞，用Hygromycin B篩選得到轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞克隆；3．采用MTT法檢測(cè)抑制A549細(xì)胞增殖率；4．采用RT—PCR檢測(cè)表皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)的抑制率。 結(jié)果1．成功構(gòu)建了針對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體的四種質(zhì)
3、粒pSilencer-EGFR Ⅰ、pSilencer-EGFR Ⅱ、pSi lencer-EGFRⅢ和 psilencer-EGFRIV；2．成功轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，經(jīng)篩選后得到穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞克隆； 3．RT—PCR和MTT檢測(cè)的結(jié)果表明，質(zhì)粒對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體mRNA的抑制率達(dá)71.2％，細(xì)胞增殖抑制率達(dá)88.85％。 結(jié)論 結(jié)果表明RNA干擾技術(shù)能有效降解靶基因的mRNA，通過(guò)對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體mRNA的抑制能有效抑制細(xì)胞
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