兔妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥模型的建立及其胎兔心臟功能變化的研究.pdf

1、背景與目的：妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(IntrahepaticCholestasisofPregnancy，ICP)是一種以皮膚瘙癢、黃疸伴肝功能改變?yōu)樘卣鞯娜焉锲诩膊?。ICP圍生兒預(yù)后不良，胎兒窘迫發(fā)生率為32～65％，胎兒死亡率也比正常妊娠高4倍，發(fā)生機(jī)制不清。 目前對(duì)ICP胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)發(fā)生機(jī)制的研究主要集中在胎盤-胎兒灌注方面，而對(duì)胎兒自身重要臟器損傷所起的作用研究甚少。研究發(fā)現(xiàn)ICP時(shí)胎盤絨毛間腔狹窄、絨毛血管痙攣，使胎

2、盤灌流不足，在宮縮來臨或胎盤膜氧擴(kuò)散功能障礙等情況下可致使胎兒處于急性缺氧狀態(tài)甚至死亡。但也有研究證實(shí)ICP胎盤絨毛間腔狹窄僅引起胎盤氧儲(chǔ)備力下降，不足以導(dǎo)致胎兒于臨產(chǎn)前突然死于宮內(nèi)。新近研究發(fā)現(xiàn)牛磺膽酸可使新生大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生Ca2+超載，心肌細(xì)胞收縮強(qiáng)度和心率顯著下降，出現(xiàn)心動(dòng)過緩甚至停搏。對(duì)ICP胎兒尸檢發(fā)現(xiàn)在心包膜上存在大量急性、致死性淤點(diǎn)性出血。同時(shí)大量臨床觀察亦發(fā)現(xiàn)在ICP胎兒胎盤與臍動(dòng)脈血流正常的情況下，可因?qū)m縮出現(xiàn)而突發(fā)

3、無任何征兆的胎死宮內(nèi)。以上研究提示，ICP發(fā)生胎兒窘迫、胎死宮內(nèi)并非胎盤灌流減少單因素的結(jié)果，可能為多種因素共同作用的結(jié)果。心臟作為機(jī)體最重要的臟器之一，其功能異?？赡芤矃⑴c了ICP胎兒并發(fā)癥的病理發(fā)生過程。 本實(shí)驗(yàn)擬通過構(gòu)建兔妊娠肝內(nèi)膽汁淤積模型，觀察ICP胎兔心臟能量代謝的變化及在常氧和低氧灌流時(shí)胎兔離體心臟功能的改變，以明確ICP胎兔是否存在心臟功能損傷，其心臟對(duì)低氧灌注的耐受性是否下降，進(jìn)而初步探討ICP胎兒窘迫、胎死宮

4、內(nèi)的心源性因素。 方法：1.孕兔32只，隨機(jī)分為4組：高、中、低劑量組自妊娠第22天，分別頸后皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg·kg-1·d-1、0.1mg·kg-1·d-1、10.05mg·kg-1·d-1，對(duì)照組頸后皮下注射生理鹽水，直至分娩。觀察孕兔血生化指標(biāo)和肝臟病理改變，驗(yàn)證孕兔是否出現(xiàn)肝內(nèi)膽汁淤積改變，以明確是否成功建立了兔ICP模型。2.將ICP組和對(duì)照組胎兔隨機(jī)分為低氧灌流ICP組(Ⅰ組)、常氧灌流ICP組(Ⅱ組)

5、、低氧灌流對(duì)照組(Ⅲ組)、常氧灌流對(duì)照組(Ⅳ組)。監(jiān)測(cè)心率(HR)、左心室最大收縮壓(LVDP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左心室內(nèi)壓最大變化速率(±dp/dtmax)及冠脈流量(CF)；測(cè)定灌流15min和30min時(shí)冠脈流出液磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌鈣蛋白I(CTn-I)含量；檢測(cè)心肌含水量；透射電鏡觀察灌流末心肌超微結(jié)構(gòu)改變。3.觀察ICP組和對(duì)照組胎兔心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，檢測(cè)心肌腺苷三磷酸(ATP)、超氧化物

6、歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量及心肌細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：1.高、中劑量組孕兔血總膽汁酸(TBA)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘膽酸(CG)均顯著升高(P＜0.01)，總膽固醇(TCH)顯著下降(P＜0.01)，而低劑量組僅TBA、CG含量高于對(duì)照組(P＜0.05)；各劑量組均有胎死宮內(nèi)、早產(chǎn)的發(fā)生，高劑量組胎兔存活率僅11.9％，中劑量組胎兔存活率為54.4％；高、中劑量組肝臟組織HE染色見肝

7、細(xì)胞腫脹，部分肝細(xì)胞胞漿內(nèi)可見膽汁樣物質(zhì)沉積；高、中劑量組肝細(xì)胞電鏡觀察均可見線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，毛細(xì)膽管擴(kuò)張，肝細(xì)胞胞漿水腫、空化，偶見膽鹽樣物質(zhì)；低劑量組與對(duì)照組肝臟組織病理改變不明顯。 2.ICP胎心在低氧灌流15min時(shí)，心率和心臟收縮功能即出現(xiàn)明顯的改變，其心搏動(dòng)次數(shù)和心室最大收縮內(nèi)壓均較常氧灌流組下降50％左右，冠脈流量顯著下降，冠脈流出液CK-MB、CTn-I含量明顯增高；低氧灌流30min時(shí)，冠脈流量降至常氧

8、灌流組的10％左右，冠脈流出液CK-MB、CTn-I含量進(jìn)一步增高，左室舒縮功能明顯減弱，心臟搏動(dòng)極度緩慢；心肌組織高度水腫。以上觀察指標(biāo)與常氧灌流ICP組和低氧灌流對(duì)照組相比均有顯著差異。常氧灌流30min內(nèi)，ICP胎兔心臟功能無明顯改變。 3.ICP組胎心組織ATP、SOD含量減少，MDA含量和細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增多，與對(duì)照組相比均具有顯著差異(P＜0.01)；電鏡觀察見ICP組胎心線粒體輕度腫脹、脫髓鞘改變，胞質(zhì)內(nèi)糖原顆粒分布

9、減少。對(duì)照組超微結(jié)構(gòu)無明顯改變。 結(jié)論：1.孕兔皮下注射苯甲酸雌二醇0.2mg·Kg-1·d-1、0.1mg·Kg-1·d-1可出現(xiàn)類似人ICP的血生化、肝內(nèi)膽汁淤積和胎死宮內(nèi)的病理改變。用0.1mg·Kg-1·d-1劑量成功構(gòu)建了運(yùn)用于本試驗(yàn)的ICP孕兔模型。2.在供氧充足的情況下，ICP胎兔心.臟舒縮功能不發(fā)生明顯改變；但I(xiàn)CP胎兔心臟對(duì)缺氧極為敏感，耐受性差，短時(shí)間的急性缺氧即可導(dǎo)致心臟舒縮功能嚴(yán)重紊亂，而且心功能損傷程度