辛硫磷對(duì)大鼠肝臟毒性的研究.pdf

1、為探討低濃度辛硫磷農(nóng)藥對(duì)肝臟的慢性毒性作用及其機(jī)理，本研究通過(guò)觀(guān)察大鼠肝臟病理組織與超微結(jié)構(gòu)改變及檢測(cè)血漿、肝臟ChE、抗氧化物酶和脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)，研究了辛硫磷農(nóng)藥慢性灌胃染毒條件下對(duì)大鼠肝臟的氧化損傷作用；并進(jìn)行了原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的染毒試驗(yàn)，通過(guò)掃描電鏡、熒光顯微鏡下觀(guān)察，Annexin-V-FITC和PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞儀測(cè)定凋亡率，雙氫羅丹明標(biāo)記細(xì)胞、流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)等方法，探討了辛硫磷對(duì)大鼠肝臟的毒性作用、致

2、細(xì)胞凋亡作用以及ROS在辛硫磷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的作用。 結(jié)果表明，辛硫磷慢性染毒，大鼠血漿和肝臟中ChE活性均顯著降低，但沒(méi)有出現(xiàn)明顯的臨床中毒癥狀，推測(cè)中毒癥狀的出現(xiàn)不僅與血漿ChE活性降低程度有關(guān)，更主要與ChE降低速度有關(guān)。大鼠肝臟的病變程度隨著染毒劑量的增加和染毒時(shí)間的延長(zhǎng)有加重趨勢(shì)。30μmol/kg劑量染毒15d，血漿和肝臟SOD、GSH-Px活性及MDA含量均無(wú)明顯變化，這也進(jìn)一步說(shuō)明辛硫磷是一種短效型低毒殺蟲(chóng)劑對(duì)人

3、畜的毒性較低。但是隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，染毒30d后，肝臟抗氧化酶活性升高和MDA濃度升高，血漿抗氧化酶活性降低，是否表明肝臟的抗氧化能力代償性增強(qiáng)，有待進(jìn)一步探討。300μmol/kg劑量的辛硫磷染毒15d，血漿SOD、GSH-Px活性降低，MDA含量明顯上升，但肝臟SOD、GSH-Px活性升高。持續(xù)染毒30d時(shí)，血漿和肝臟SOD、GSH-Px活性均明顯下降，MDA含量極顯著升高(P<0.01)，表明辛硫磷農(nóng)藥持續(xù)染毒后，不僅可引起大鼠

4、機(jī)體氧化應(yīng)激，而且可以通過(guò)誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化造成肝臟結(jié)構(gòu)的損傷。 本試驗(yàn)中30μmol/L 辛硫磷對(duì)體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞持續(xù)染毒24h，掃描電鏡下以及吖啶橙染色后熒光顯微鏡下都觀(guān)察到凋亡細(xì)胞，證明了低濃度的辛硫磷可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡。不同劑量的辛硫磷對(duì)原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞染毒，肝細(xì)胞染毒12h，100μmol/L 劑量組死亡率極顯著增加 (P<0.01)、300μmol/L劑量組死亡率達(dá)到3.01％。染毒24h，隨著染毒劑量的增大，

5、細(xì)胞死亡率呈明顯的上升趨勢(shì)，差異均極顯著(P<0.01)，300μmol/L劑量組死亡率已高達(dá)14.28％。說(shuō)明辛硫磷農(nóng)藥對(duì)肝細(xì)胞具有直接的毒性作用，而且細(xì)胞死亡率隨染毒劑量增大和染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，表明辛硫磷作用劑量的增加或作用時(shí)間的延長(zhǎng)，均可增加對(duì)細(xì)胞的毒性損傷。本試驗(yàn)測(cè)得各染毒組大鼠肝細(xì)胞隨染毒劑量的增大和染毒時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡率增大，與對(duì)照組比較，30μmol/L 染毒12h凋亡率顯著增加(P<0.05)，100

6、μmol/L 劑量組凋亡率極顯著增加(P<0.01)，并且300μmol/L 劑量組細(xì)胞凋亡率達(dá)到最大3.93％；染毒24h后，與對(duì)照組相比，各染毒組細(xì)胞凋亡率極顯著增加(300μmol/L 劑量組除外)，100μmol/L 劑量組細(xì)胞凋亡率達(dá)到最大7.53％。說(shuō)明低濃度的辛硫磷農(nóng)藥可以誘導(dǎo)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)隨著辛硫磷濃度的升高，肝細(xì)胞內(nèi)ROS水平逐漸升高，細(xì)胞凋亡率與細(xì)胞內(nèi)ROS水平呈正相關(guān)。提示在辛硫磷農(nóng)藥致大鼠肝細(xì)胞凋亡過(guò)