Ras-Raf-Erk1-2信號(hào)通路過(guò)度表達(dá)與自閉癥的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　 自閉癥也稱(chēng)孤獨(dú)癥，是較嚴(yán)重的全面性精神發(fā)育障礙性疾病，和遺傳有一定關(guān)系，但是致病基因尚未被查出，因此臨床診斷困難，而且無(wú)法治愈。自閉癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)主要包括其核心行為癥狀:(1)社會(huì)關(guān)系障礙;(2)語(yǔ)言溝通障礙;(3)興趣狹窄和刻板重復(fù)動(dòng)作[1]。男女患病率比例為4:1[2]。亞洲、歐洲和北美地區(qū)確診患病率約0.6％-1％[3，4，5，6]。我國(guó)尚無(wú)全國(guó)大規(guī)模的的流行病學(xué)調(diào)查，估計(jì)嬰幼兒發(fā)病率約0.4％左右[

2、7，8]。在過(guò)去20年內(nèi)，歐洲、美國(guó)的自閉癥發(fā)病率上升5-10倍[9，10]。一些藥物用于治療自閉癥，但效果欠佳[11]，主要依靠行為治療改善患者的社交及語(yǔ)言交流能力[12]。英國(guó)每年用于治療自閉癥兒童的費(fèi)用達(dá)2.7億英鎊[13]，美國(guó)每個(gè)自閉癥兒童早期醫(yī)療服務(wù)的每年開(kāi)支是35，000美元[14]，對(duì)社會(huì)及家庭造成沉重的精神及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，使自閉癥成為重要的公共健康問(wèn)題。
　　 自閉癥病因尚不清楚，過(guò)去曾經(jīng)認(rèn)為，其病因可能與社會(huì)心理

3、因素有關(guān)，但目前普遍認(rèn)為是多因素導(dǎo)致，主要包括遺傳、環(huán)境因素[15,16,17,18]。10％到20％自閉癥患者存在染色體異常情況，目前已知的相關(guān)染色體有7q、22q13、2q37、18q、Xp[19]。細(xì)胞遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)常見(jiàn)的自閉癥易感基因包括:NLGNS(NLGN1，NLGN3,andNLGN4X),MECP2、FMR1、TSC1/2、SHANK3、CNTNAP2等[20,21,22,23]，提示孤獨(dú)癥是一種多基因遺傳病。
　

4、　 有學(xué)者猜測(cè)具有攜帶自閉癥易感基因背景者，暴露于危險(xiǎn)環(huán)境因子[24,25]，發(fā)病率明顯升高[26]。主要致病因子包括:汞，鎘，鎳，三氯乙烯，氯乙烯[27]，尤其在妊娠期或圍產(chǎn)期暴露[28]。研究發(fā)現(xiàn)胚胎發(fā)育早期，即受精后20至40天的器官形成期為自閉癥發(fā)病的易感期。如果在此期間胚胎受藥物、重金屬或母體不良狀況等宮內(nèi)環(huán)境因素的影響，胚胎未來(lái)發(fā)生自閉癥的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。產(chǎn)前暴露于“丙戊酸”、“乙醇”、“沙利度胺”和“米索前列醇”，可導(dǎo)致子

5、代患自閉癥的機(jī)率增加[29]。早于1943年LeoKanner首次發(fā)現(xiàn)11名1歲的兒童表現(xiàn)出“情感接觸中孤獨(dú)性障礙”時(shí)，就推測(cè)自閉癥可能來(lái)源于產(chǎn)前[30]。最新研究表明當(dāng)嬰兒出生時(shí)體重低于正常嬰兒體重時(shí)，其患上自閉癥的幾率比正常體重的嬰兒高出5倍[31]。在先天異常與環(huán)境因素相互作用下，自閉癥患者的臨床癥狀加重，或許由于遺傳脆弱性，神經(jīng)系統(tǒng)更容易達(dá)到自閉癥的發(fā)病“門(mén)檻”[32]。
　　 最近有研究發(fā)現(xiàn)16號(hào)染色體缺失與自閉癥相關(guān)

6、，而編碼ERK1蛋白的MAPK3基因位于16號(hào)染色體[33]。Erk2所在的22q11.2缺失也與自閉癥發(fā)病相關(guān)[105，106]。MAPK基因位于22q1.3DGS區(qū)，許多患者的這個(gè)區(qū)域缺失，導(dǎo)致一系列的心臟、皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)異常[105-108]，臨床病例研究發(fā)現(xiàn)部分自閉癥患者存在22q11.2缺失和重復(fù)，提示22q11.2可能與自閉癥相關(guān)研究結(jié)果表明，MAPK級(jí)聯(lián)不同元素的的單倍劑量不足可以導(dǎo)致類(lèi)似的解剖異常和智力障礙。越來(lái)越多研究

7、表明自閉癥可能與神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)。Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。我們前期研究也發(fā)現(xiàn)自閉癥患者及自閉癥模型小鼠BTBRT+tf/J(BTBR)的大腦皮質(zhì)中Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路蛋白表達(dá)異常升高[34，35]，Mek抑制劑U0126可抑制BTBR小鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路過(guò)度上調(diào)，部分糾正BTBR小鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞各種異常行為，進(jìn)一步驗(yàn)證Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路可

8、能參與自閉癥的發(fā)病過(guò)程。
　　 BTBR是一種近交系小鼠，具有自閉癥的三大核心癥狀:社交減少、社交場(chǎng)合中話(huà)語(yǔ)少、重度的重反復(fù)理毛行為[36-38]。BTBR小鼠也是唯一一種具備所有自閉癥的行為的品系。最近研究發(fā)現(xiàn)BTBR小鼠DISC1基因上有25對(duì)堿基對(duì)缺失，而DISC1證實(shí)是精神障礙疾病的易感基因，包括精神分裂癥、自閉癥[39]。因此，BTBR小鼠是目前研究自閉癥的理想模型。
　　 U0126（1,4-二氨基-2，3-

9、氰基-1,4-雙[2-氨基苯基硫代]丁二烯）是有絲分裂原激活蛋白激酶激酶1/2(Mek1/2)抑制劑，能抑制細(xì)胞遷移、侵襲、黏附、轉(zhuǎn)移、mRNA表達(dá)及蛋白激活，例如MMP-1，MMP-2，MMP-9和MT1-MMP[40]。已被用于在體內(nèi)和體外研究[41]。
　　 我們前期試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2周大小的BTBR小鼠大腦皮質(zhì)Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路異常上調(diào)，但Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路異常上調(diào)與時(shí)間關(guān)系尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)以

10、BTBR小鼠為自閉癥模型，應(yīng)用WesternBlot檢測(cè)不同年齡的BTBR小鼠大腦中Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路的表達(dá)情況，探討自閉癥Ras/Raf/Erk1/2的異常表達(dá)情況及起始時(shí)間點(diǎn)。
　　 根據(jù)Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路異常表達(dá)的開(kāi)始時(shí)間，應(yīng)用Mek抑制劑降低BTBR小鼠中Erk及Mek的磷酸化水平，然后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，探討Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路與自閉癥的異常行為的影響作用，免疫熒光檢測(cè)小

11、鼠大腦皮質(zhì)區(qū)、海馬CA1及CA3區(qū)中VGLUT1/VGAT比值、Map2和PSD-95的表達(dá)情況，DiI染色檢測(cè)神經(jīng)元成熟樹(shù)突棘的形成情況，進(jìn)一步探討Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路與自閉癥的發(fā)病關(guān)系。
　　 方法:
　　 1、WesternBlot檢測(cè)不同年齡的BTBR小鼠大腦中Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路的表達(dá)情況
　　 分別解剖新生、3周、6周大小的BTBRT+tfJ小鼠及其相對(duì)應(yīng)年齡的C57B

12、L/6(B6)小鼠的大腦組織，進(jìn)行蛋白勻漿，應(yīng)用WesternBlot檢測(cè)每個(gè)年齡段大腦組織中Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路中各成員的磷酸化蛋白表達(dá)情況(包括P-A-Raf、P-B-Raf、P-C-Raf、P-Erk1/2、P-Mek1/2)。
　　 2、Mek1/2抑制劑U0126治療BTBR小鼠
　　 應(yīng)用Mek1/2抑制劑U0126治療BTBR小鼠，從出生3天開(kāi)始，400μg/kg，腹腔注射，每天1次，連續(xù)3

13、周。對(duì)照組包括相應(yīng)年齡的BTBR小鼠及B6小鼠，予以相應(yīng)劑量的40％DMSO腹腔注射，每天1次，連續(xù)3周。應(yīng)用WesternBlot檢測(cè)Mek1/2抑制劑對(duì)P-Mek1/2及P-Erk1/2的抑制情況，初步評(píng)價(jià)治療效果。
　　 3、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Mek1/2抑制劑治療后對(duì)BTBR小鼠異常行為的影響情況
　　 根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)動(dòng)物造成壓力從輕到重的順序，應(yīng)用社交活動(dòng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、明暗穿箱實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、埋珠實(shí)驗(yàn)、恐懼制

14、約實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)Mek1/2抑制劑治療后對(duì)BTBR小鼠社交行為、焦慮情況、自發(fā)活動(dòng)、重復(fù)與刻板動(dòng)作、記憶能力的影響。實(shí)驗(yàn)安排見(jiàn)表1:
　　 兩個(gè)實(shí)驗(yàn)間需間隔2-3天。
　　 4、免疫熒光檢測(cè)Mek1/2抑制劑對(duì)BTBR小鼠神經(jīng)系統(tǒng)VGLUT1/VGAT比值、Map2和PSD-95表達(dá)情況的影響
　　 BTBR小鼠及B6小鼠接受U0126DMSO治療3周后，取其大腦組織固定后冰凍切片，免疫熒光技術(shù)檢測(cè)小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)、

15、海馬CA1及CA3區(qū)中VGLUT1、VGAT、Map2和PSD-95的表達(dá)情況，拍攝條件一致下應(yīng)用Z-stack疊加拍片，ImageJ圖像軟件分析熒光強(qiáng)度，每組6個(gè)切片，每個(gè)功能區(qū)域隨機(jī)數(shù)10個(gè)細(xì)胞，共計(jì)數(shù)60個(gè)神經(jīng)細(xì)胞。
　　 5、DiI染色檢測(cè)Mek1/2抑制劑對(duì)BTBR小鼠神經(jīng)元成熟樹(shù)突棘的形成的影響
　　 BTBR小鼠及B6小鼠接受U0126DMSO治療3周后，取其大腦組織固定后振蕩切片，Vybrant-DiIc

16、ell-labeling孵育36小時(shí)后浸洗、封片。一周內(nèi)應(yīng)用共聚焦顯微鏡Z-stack疊加拍片;每組3只小鼠，每只小鼠計(jì)數(shù)3-4個(gè)神經(jīng)元，每組共計(jì)算9-12個(gè)樹(shù)突棘。
　　 6、統(tǒng)計(jì)方法
　　 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組間的蛋白表達(dá)水平比較應(yīng)用兩樣本t檢驗(yàn)。三組間的蛋白表達(dá)水平比較應(yīng)用方差分析。社交活動(dòng)實(shí)驗(yàn)中三組小鼠三個(gè)房間的停留時(shí)間、進(jìn)入次數(shù)、嗅的時(shí)間比較應(yīng)用重復(fù)測(cè)量的方差分析，自梳理及靜止時(shí)間應(yīng)用方差

17、分析;高架十字迷宮中三組間開(kāi)臂時(shí)間應(yīng)用方差分析;明暗穿箱實(shí)驗(yàn)中三組間明箱停留時(shí)間、進(jìn)入次數(shù)應(yīng)用方差分析;曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中自梳理時(shí)間、面壁站立時(shí)間及非活動(dòng)時(shí)間應(yīng)用方差分析;埋珠實(shí)驗(yàn)中被掩埋珠子的數(shù)量應(yīng)用方差分析;恐懼制約實(shí)驗(yàn)中三組間的凝滯時(shí)間應(yīng)用方差分析;三組間免疫熒光強(qiáng)度、成熟突觸數(shù)目比較采用方差分析。先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)用Welch校正;組間多重比較，方差齊性時(shí)采用LSD法，方差不齊時(shí)采用DunnettT3法。所有數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±

18、標(biāo)準(zhǔn)誤，P值＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果:
　　 1、BTBR小鼠大腦組織Ras/Raf/Erk1/2信號(hào)通路的異常表達(dá)時(shí)間
　　 與B6小鼠相比，BTBR小鼠大腦組織中P-B-Raf、P-C-Raf、P-Mek1/2、P-Erk1/2的條帶更強(qiáng)，其平均表達(dá)量均升高(P-B-Raf:t=7.192，P＜0.001;P-C-Raf:t=2.661，P=0.024;P-Mek1/2:t=8.912,P＜0.0

19、01;P-Erk1/2:t=3.733,P=0.004)，其中P-Mek1/2升高最明顯，達(dá)5.318倍。3周齡大小BTBR小鼠及B6小鼠腦組織中P-B-Raf、P-C-Raf、P-Mek1/2、P-Erk1/2蛋白表達(dá)水平未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P-B-Raf:t=1.663,P=0.127;P-C-Raf:t=1.019,P=0.332;P-Mek1/2:t=2.188,P=0.053;P-Erk1/2:t=1.341，P=0.210)。與

20、B6小鼠相比，6周齡大小BTBR小鼠各蛋白的表達(dá)量未見(jiàn)異常升高(P-B-Raf:t=2.127，P=0.059;P-C-Raf:t=0.394，P=0.702;P-Mek1/2:t=0.961,P=0.359;P-Erk1/2:t=0.916,P=0.381)。
　　 2、Mek1/2抑制劑對(duì)P-Erk1/2蛋白的抑制作用
　　 應(yīng)用Mek1/2抑制劑U0126連續(xù)治療3周后，WesternBlot檢測(cè)BTBRU0126

21、、BTBRDMSO、B6DMSO三組間腦組織的P-Erk1/2表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)三組間有顯著性差異(F=6.398，P=0.010)。BTBRU0126組的P-Erk1/2蛋白條帶較BTBRDMSO組弱，相對(duì)表達(dá)量下降約47％(F=3.175,P=0.010)。而B(niǎo)6DMSO組的相對(duì)表達(dá)量與BTBRDMSO組間沒(méi)有顯著性差異(F=1.342,P=0.209)。
　　 3、Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)BTBR小鼠行為的影響

22、　　 3.1.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)BTBR小鼠社交行為的影響
　　 社交行為測(cè)試學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，社交(Sociability)階段三組停留在陌生小鼠房間(strangerchamber)的時(shí)間比空鐵杯房間(novelobjectchamber)更多(F=18.124，P=0.001)。B6DMSO組停留在陌生小鼠房間(strangerchamber)的時(shí)間與空鐵杯房間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=8.383,P=0.015)，但

23、是BTBRU0126組、BTBRDMSO組在陌生小鼠房間的時(shí)間與空鐵杯房間時(shí)間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=2.513，P=0.141;F=1.635，P=0.227)。三組在陌生小鼠房間嗅的時(shí)間與空鐵杯房間的時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=15.201,P=0.000)，B6DMSO組、BTBRU0126在陌生小鼠房間嗅的時(shí)間與空鐵杯房間的時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=9.598，P=0.010;F=6.783，P=0.024)，而B(niǎo)TBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差

24、異(F=1.693，P=0.220)。
　　 3.2.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)BTBR小鼠焦慮情緒的影響
　　 高架十字迷宮試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果顯示三組間的開(kāi)臂停留時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=3.607,P=0.038)，但是BTBRU0126組與BTBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.159)。明暗穿箱實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果顯示三組間的明箱(lightbox)停留時(shí)間百分比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=26.219,P=0.000)，但是BT

25、BRU0126和BTBRDMSO組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=0.902,P=0.377）。三組間的明箱進(jìn)入次數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=7.658,P=0.026)，B6組和BTBRDMSO組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.009)，但B6組和BTBRU0126組、BTBRU0126和BTBRDMSO組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.0.056;P=0.435)。
　　 3.3.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)BTBR小鼠重復(fù)刻板動(dòng)作的影響
　　

26、 應(yīng)用埋珠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的重復(fù)刻板動(dòng)作情況，計(jì)算每組掩埋1/2以上的大理石個(gè)數(shù)，發(fā)現(xiàn)三組間掩埋的大理石球沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=2.940，P=0.067)。社交行為測(cè)試學(xué)習(xí)慣階段及社交階段三組間的自梳理時(shí)間均有顯著性差異(F=15.526，P=0.000;F=0.888，P=0.000），但BTBRU0126組、BTBRDMSO組沒(méi)有顯著性差異(P=0.219;P=0.596)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)三組間的自梳理時(shí)間(Groomingtime)有統(tǒng)計(jì)學(xué)

27、意義(F=9.649，P=0.001)，但是BTBRU0126組與BTBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.195)。
　　 3.4.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)BTBR小鼠自發(fā)活動(dòng)情況的影響
　　 應(yīng)用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)動(dòng)物的自發(fā)活動(dòng)情況，結(jié)果顯示三組間的非活動(dòng)時(shí)間(immobiletime)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=11.694，P＜0.001)，兩兩之間比較發(fā)現(xiàn)BTBRU0126組與BTBRDMSO組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.

28、026)。三組間的面壁站立時(shí)間(rearingtime)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=9.134，P=0.001)，但是BTBRU0126組與BTBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.198)。三組間的中央停留時(shí)間百分比(％centertime)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=15.780，P＜0.001)，但是BTBRU0126組與BTBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.665)。
　　 3.5.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)BTBR小鼠記憶力的

29、影響
　　 條件恐實(shí)驗(yàn)主要用于測(cè)試動(dòng)物的記憶能力，結(jié)果顯示三組間基本的凝滯時(shí)間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.654，P=0.526)，訓(xùn)練后三組間的凝滯時(shí)間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.378，P=0.688);關(guān)聯(lián)階段(context)三組間的凝滯時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=3.404，P=0.045)，BTBRU0126組與BTBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.656)，B6DMSO組與BTBRDMSO組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.020)，

30、但是B6DMSO組與BTBRU0126組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.054)。變更關(guān)聯(lián)階段(cue)三組間的凝滯時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=12.163，P＜0.001)，BTBRU0126組與BTBRDMSO組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.825)。
　　 4、Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)大腦神經(jīng)系統(tǒng)VGLUTI/VGAT比值、Map2和PSD的影響
　　 4.1.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)大腦神經(jīng)系統(tǒng)VGLUTI/V

31、GAT比值的影響
　　 結(jié)果顯示海馬CA1區(qū)三組間的VGLUTI/VGAT比值有顯著性差異(F=14.534,P＜0.001)，B6DMSO和BTBRU0126間有顯著性差異(P=0.021)，BTBRU0126和BTBRDMSO間有顯著性差異（P=0.003），熒光強(qiáng)度下降24.234％，B6DMSO和BTBRDMSO間有顯著性差異(P＜0.001)，BTBRDMSO的VGLUTI/VGAT比值是B6DMSO的1.748倍。海

32、馬CA3區(qū)三組間的VGLUTI/VGAT比值VGLUTI/VGAT比值沒(méi)有顯著性差異(F=2.236，P=0.110)。大腦皮質(zhì)區(qū)三組間的VGLUTI/VGAT比值沒(méi)有顯著性差異(F=0.330，P=0.720)。
　　 4.2.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)大腦神經(jīng)系統(tǒng)MAP2表達(dá)的影響
　　 結(jié)果顯示海馬CA1區(qū)三組間MAP2熒光強(qiáng)度有顯著性差異(F=89.680,P＜0.001)，B6DMSO和BTBRU012

33、6間有顯著性差異(P＜0.001)，BTBRU0126和BTBRDMSO間有顯著性差異(P＜0.001)，B6DMSO和BTBRDMSO間沒(méi)有顯著性差異(P=0.139)。海馬CA3區(qū)三組間的MAP2熒光強(qiáng)度有顯著性差異(F=151.246，＜0.001)，B6DMSO和BTBRU0126間有顯著性差異(P＜0.001)，BTBRU0126和BTBRDMSO間有顯著性差異(P＜0.001)，B6DMSO和BTBRDMSO間沒(méi)有顯著性差異

34、(P=0.139)。三組小鼠的大腦皮質(zhì)區(qū)MAP2熒光強(qiáng)度弱，無(wú)法檢測(cè)。
　　 4.3.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)大腦神經(jīng)系統(tǒng)PSD的影響
　　 結(jié)果顯示海馬CA1區(qū)三組間PSD熒光強(qiáng)度有顯著性差異(F=4.963，P=0.008)，B6DMSO和BTBRU0126間沒(méi)有顯著性差異(P=0.930)，BTBRU0126和BTBRDMSO間有顯著性差異(P=0.006)，B6DMSO和BTBRDMSO間有顯著性差異(

35、P=0.008)。海馬CA3區(qū)三組間的PSD熒光強(qiáng)度沒(méi)有顯著性差異(F=0.621，P=0.539)。大腦皮質(zhì)區(qū)三組間PSD熒光強(qiáng)度有顯著性差異(F=54.489,P＜0.001)，B6DMSO和BTBRU0126間有顯著性差異(P＜0.001)，BTBRU0126和BTBRDMSO間有顯著性差異(P＜0.001)，B6DMSO和BTBRDMSO間沒(méi)有顯著性差異(P＜0.001)。
　　 5.Mek1/2抑制劑(U0126)對(duì)大

36、腦皮質(zhì)成熟樹(shù)突棘形成的影響
　　 應(yīng)用DiI標(biāo)記檢測(cè)B6DMSO、BTBRU0126和BTBRDMSO三組小鼠大腦組織中的樹(shù)突棘的形態(tài)。染色結(jié)果提示，使用U01261治療后，BTBR皮質(zhì)區(qū)成熟樹(shù)突棘密度是BTBR未處理組的2倍(P=0.024)，但仍低于B6DMSO組(B6DMSOVSBTBRU0126:P=0.002;B6DMSOVSBTBRDMSO:P＜0.001)
　　 結(jié)論
　　 1.應(yīng)用WesternB

37、lot檢測(cè)不同年齡的BTBR小鼠大腦中Erk1/2信號(hào)通路的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)新生鼠的Erk1/2信號(hào)通路表達(dá)明顯升高，3周時(shí)表達(dá)水平與B6相當(dāng)，一直持續(xù)到成年。
　　 2.Mek抑制劑對(duì)新生小鼠進(jìn)行腹腔注射，下調(diào)BTBR小鼠大腦的ERK磷酸化水平，行為學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)Mek抑制劑能部分改善BTBR小鼠的社交能力及自發(fā)活動(dòng)，但焦慮癥狀、重復(fù)刻板動(dòng)作、學(xué)習(xí)記憶能力未見(jiàn)明顯改變。
　　 3.Mek1/2抑制劑下降Erk1/2活化水平阻