miRNAs的表達(dá)與原發(fā)性IgA腎病病情相關(guān)性初步研究.pdf

1、背景
　　IgA腎病是全世界最常見的原發(fā)性腎小球疾病，容易進(jìn)展至終末期腎臟病(endstagerenaldisease，ESRD)。但是，IgA腎病的診斷和動(dòng)態(tài)檢測(cè)依賴腎組織活檢，而腎活檢為有創(chuàng)性的檢查，且重復(fù)腎活檢患者多難以接受。因而，探索IgA腎病非侵入性的診斷方法任重道遠(yuǎn)。miRNAs是一種參與轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的非編碼RNA，其表達(dá)異?？赡軐?dǎo)致人類多種疾病，包括IgA腎病，異常表達(dá)的miRNAs可以導(dǎo)致IgA腎病患者腎組織細(xì)胞

2、結(jié)構(gòu)的改變及類型的轉(zhuǎn)化、免疫分子結(jié)構(gòu)的改變、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的異常等，從而引起腎組織損傷。目前，眾多的研究發(fā)現(xiàn)血漿及尿液中存在穩(wěn)定表達(dá)的miRNAs，可抵制RNase的降解。因此，血漿或尿液中與IgA腎病病理形態(tài)學(xué)改變相關(guān)的miRNAs或許可以成為其新的診斷標(biāo)志物。然而，miRNAs的表達(dá)水平與IgA腎病病情的關(guān)系尚無確切結(jié)論，血漿或尿液中miRNAs的表達(dá)水平是否能夠真正取代腎活檢仍值得探討。本研究選取與IgA腎病發(fā)病和腎臟纖維化相關(guān)的幾

3、種miRNAs，通過對(duì)IgA腎病患者的腎組織、血漿及尿液miRNAs同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，初步研究腎組織、血漿及尿液miRNAs的表達(dá)與IgA腎病病情的相關(guān)性。
　　目的
　　通過檢測(cè)miR-148b、miR-194、miR-200a及miR-382在原發(fā)性IgA腎病腎組織、血漿及尿液中的表達(dá)水平，初步探討miRNAs的表達(dá)與該疾病病情的相關(guān)性，為血漿及尿液中的miRNAs在IgA腎病診斷中的應(yīng)用提供參考，也為尋找IgA腎病非侵入性

4、診斷標(biāo)志物提供新思路。
　　方法
　　1.選取鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎臟內(nèi)科2012年12月至2013年6月首次經(jīng)腎組織活檢及臨床、實(shí)驗(yàn)室檢查綜合確診為原發(fā)性IgA腎病患者34例，平均年齡(32.74±10.57)歲，男女比例1∶1.1。該34例入組患者在腎活檢當(dāng)日清晨同時(shí)留取晨尿及空腹靜脈血標(biāo)本，其中7例患者留取腎穿刺組織標(biāo)本。收集所有入組患者的臨床及病理資料，并對(duì)其病理結(jié)果進(jìn)行Hass分級(jí)，其中符合Hass分級(jí)Ⅰ-Ⅱ級(jí)患者

5、10例，Ⅲ級(jí)17例，Ⅳ-Ⅴ級(jí)7例。對(duì)照組選自我院同期門診年齡及性別匹配的健康體檢者13例，每個(gè)入組對(duì)象同時(shí)留取晨尿及空腹靜脈血標(biāo)本，對(duì)照組腎組織標(biāo)本選自同期在我院行腎腫瘤切除術(shù)的患者7例，取遠(yuǎn)離腫瘤的正常腎組織。
　　2.采用TRIzolLSReagent（Invitrogenlifetechnologies）抽提腎組織、血漿及尿液中的RNA，使用NanoDrop(@)ND-1000(Nanodrop，Wilmington，Del

6、aware，USA)測(cè)定RNA的濃度和純度，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-timePCR)技術(shù)定量檢測(cè)腎組織、血漿及尿液中miR-148b、miR-194、miR-200a及miR-382的表達(dá)水平。選擇RNU6B作為內(nèi)參，數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCt法進(jìn)行分析。
　　3.比較(1)IgA腎病組和對(duì)照組間腎組織、血漿及尿液4種miRNAs的表達(dá)水平是否有差異;(2)IgA腎病患者血漿及尿液4種miRNAs的表達(dá)水平與Hass分級(jí)的關(guān)系

7、;(3)IgA腎病患者血漿及尿液4種miRNAs的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系;(4)IgA腎病患者血漿及尿液4種miRNAs的表達(dá)水平與牛津病理分型的關(guān)系。正態(tài)分布數(shù)據(jù)兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用One-wayANOVA，多個(gè)變量間的兩兩比較采用Bonferroni檢驗(yàn)，將檢驗(yàn)水準(zhǔn)校正為0.017(0.05/3)。相關(guān)性檢驗(yàn)應(yīng)用Pearson相關(guān)（服從正態(tài)分布的資料）或Spearman秩相關(guān)（不服從正態(tài)分布的資料）。以P＜0.05

8、表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　納入IgA腎病組血漿及尿液標(biāo)本各34例，腎穿刺組織標(biāo)本7例;對(duì)照組血漿及尿液標(biāo)本各13例，正常腎組織標(biāo)本7例。
　　(1)IgA腎病組和對(duì)照組間腎組織、血漿及尿液miRNAs表達(dá)水平的比較:腎組織miR-148b、miR-194、miR-200a的表達(dá)水平下調(diào)(P＜0.05)，miR-382的表達(dá)水平上調(diào)(P＜0.05);血漿miR-148b、miR-194、miR-382的表達(dá)水

9、平下調(diào)(P＜0.05)，miR-200a的表達(dá)水平上調(diào)(P＜0.05);尿液miR-148b、miR-382的表達(dá)水平上調(diào)(P＜0.05)，miR-194、miR-200a的表達(dá)水平下調(diào)(P＜0.05)。
　　(2)不同Hass分級(jí)IgA腎病患者血漿miRNAs表達(dá)水平分析:miR-148b和miR-194的表達(dá)水平隨IgA腎病Hass分級(jí)的升高而下降(P＜0.017)。Hass分級(jí)Ⅲ級(jí)和Ⅳ-Ⅴ級(jí)患者miR-382的表達(dá)水平低于Ⅰ

10、-Ⅱ級(jí)(P＜0.017)。Hass分級(jí)Ⅰ-Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ-Ⅴ級(jí)患者miR-200a的表達(dá)水平無顯著性差異(P＞0.05)。
　　(3)不同Hass分級(jí)IgA腎病患者尿液miRNAs表達(dá)水平的分析:IgA腎病Hass分級(jí)Ⅳ-Ⅴ級(jí)患者miR-148b的表達(dá)水平高于Ⅲ級(jí)(P＜0.017)。Hass分級(jí)Ⅰ-Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)患者miR-194的表達(dá)水平高于Ⅳ-Ⅴ級(jí)(P＜0.017)。Hass分級(jí)Ⅰ-Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ-Ⅴ級(jí)患者miR-200a、miR

11、-382的表達(dá)水平無顯著性差異(P＞0.05)。
　　(4)IgA腎病患者血漿及尿液miRNAs的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析:IgA腎病患者尿液miR-148b的表達(dá)水平與血清尿酸、血清補(bǔ)體C4呈負(fù)相關(guān)性(P＜0.05)，尿液miR-382的表達(dá)水平與尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān)性(P＜0.05)。尿液miR-194、miR-200a及血漿4種miRNAs與血清肌酐、腎小球?yàn)V過率、血尿素氮、血尿酸、血胱抑素、血總蛋白、血白蛋白、血球蛋

12、白、血清總膽固醇、血清三酰甘油、血清高密度脂蛋白、血清低密度脂蛋白、血紅蛋白、24小時(shí)尿蛋白定量、尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，血清補(bǔ)體C3、血清補(bǔ)體C4、血壓均無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　(5)不同牛津病理分型IgA腎病患者血漿及尿液miRNAs表達(dá)水平的比較:牛津病理分型T0型IgA腎病患者尿液miR-200a的表達(dá)水平高于T1-2型（P＜0.05)，尿液miR-148b、miR-194、miR-382及血漿4種miRNAs的表達(dá)水平

13、在E、S、T分型間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論
　　IgA腎病組腎組織、血漿及尿液miR-148b、miR-194、miR-200a、miR-382的表達(dá)水平與對(duì)照組相比均存在顯著性差異，且尿液miRNAs的表達(dá)水平與腎組織一致性較好。血漿miR-148b、miR-194、miR-382及尿液miR-148b、miR-194、miR-200a的表達(dá)與IgA腎病病理損傷程度相關(guān)，尿液miR-148b、miR-382