蘆丁干預(yù)豬鏈球菌生物被膜形成對(duì)莢膜多糖含量和結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、2型豬鏈球菌(Streptococcus suis，S.suis)是一種重要的人獸共患病病原菌，形成生物被膜(biofilm，BF)后，細(xì)菌群體耐藥性極強(qiáng)，在感染處難以全部清除，致使感染遷延不愈，因此，怎樣抑制生物被膜形成以及減少生物被膜感染是獸醫(yī)臨床急需解決的難題，已成為海內(nèi)外研究人員關(guān)注的重點(diǎn)。2型豬鏈球菌生物被膜的形成過程非常復(fù)雜，其經(jīng)過黏附、聚集、成熟、脫落后再次循環(huán)的過程，在細(xì)菌經(jīng)過24 h培養(yǎng)后完成黏附過程，在60～72h生

2、物被膜成熟。黏附是生物被膜形成的第一步驟，并且是干預(yù)生物被膜的形成及減少生物被膜感染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。莢膜多糖作為2型豬鏈球菌的毒力因子，不但有抗吞噬、黏附和定植的作用，還可以調(diào)控黏附影響豬鏈球菌生物被膜的形成。當(dāng)莢膜多糖的含量下降時(shí)，促進(jìn)了生物被膜的形成，但其結(jié)構(gòu)改變對(duì)生物被膜影響尚不清楚。
　　蘆丁(rutin)是黃酮類化合物，在自然界中普遍存在，具有多方面的生物活性，價(jià)廉易得。而且本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)丁香葉水提物對(duì)豬鏈球菌生物被膜具有

3、很好的干預(yù)作用。通過灰色關(guān)聯(lián)度和譜效關(guān)系分析，確定丁香葉中發(fā)揮作用的主要活性成分為蘆丁，但其對(duì)莢膜多糖含量和結(jié)構(gòu)的影響尚不清楚。故本試驗(yàn)從莢膜多糖角度出發(fā)，在黏附階段，研究其含量、結(jié)構(gòu)變化與干預(yù)豬鏈球菌生物被膜形成的關(guān)系。
　　在蘆丁干預(yù)下，在豬鏈球菌生物被膜形成的黏附階段，通過離心法和酶解法提取莢膜粗多糖，采用Sepharcryl S-300凝膠滲透層析柱純化莢膜粗多糖后，通過苯酚-硫酸法測得對(duì)照組與蘆丁組莢膜多糖的含量分別為5

4、0.54±2.69％和60.46±4.91％，蘆丁干預(yù)豬鏈球菌生物被膜后莢膜多糖的含量顯著升高(P＜0.05)。
　　經(jīng)過薄層色譜法(TLC)和高效液相色譜法(HPLC)分析，對(duì)照組與蘆丁組莢膜多糖均含有半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、N-乙酰氨基葡萄糖(GlcN)、鼠李糖(Rha)和唾液酸(Neu5Ac)。對(duì)照組單糖的摩爾數(shù)比為:Rha∶ Gal∶ Glc∶ GlcN=1∶2.12∶1.09∶0.71，蘆丁組單糖的摩爾數(shù)比為

5、:Rha∶ Gal∶ Glc∶ GlcN=1∶2.26∶0.95∶0.73，蘆丁干預(yù)豬鏈球菌生物被膜后莢膜多糖的單糖摩爾比值差異不顯著(P＞0.05)。
　　通過核磁共振光譜(NMR)對(duì)對(duì)照組和蘆丁組莢膜多糖與其對(duì)應(yīng)脫唾液酸后的產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果顯示對(duì)照組與蘆丁組莢膜多糖的1H-NMR圖譜相同，其脫唾液酸莢膜多糖產(chǎn)物的1H-NMR圖譜也相同，說明蘆丁干預(yù)豬鏈球菌生物被膜后與對(duì)照組相比莢膜多糖結(jié)構(gòu)未發(fā)生改變。
　　綜上所述，蘆