大環(huán)內(nèi)酯類及β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)豬鏈球菌生物被膜的體外作用研究.pdf

1、豬鏈球菌病是由豬鏈球菌引起的一種重要的人畜共患病，可導(dǎo)致豬的腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎以及敗血癥等癥狀。最常見的致病類型為血清2型豬鏈球菌，不僅對(duì)豬的致病性最強(qiáng)，而且可感染特定人群并致死，給人類公共衛(wèi)生和養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大影響。當(dāng)豬鏈球菌形成生物被膜時(shí)，生物被膜為細(xì)菌提供了一種保護(hù)性生活方式，提高了其抗逆性和致病性。因此，本試驗(yàn)研究了大環(huán)內(nèi)酯類及β-內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)豬鏈球菌及其生物被膜的抗菌活性，并分析大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)生物被膜的干預(yù)作用及與β

2、-內(nèi)酰胺類藥物聯(lián)用對(duì)生物被膜的體外作用，為豬鏈球菌生物被膜的耐藥性及臨床上合理的治療豬鏈球菌生物被膜感染提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 以美國臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，采用微量稀釋法測定了大環(huán)內(nèi)酯類藥物和β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)4株2型豬鏈球菌的最小抑菌濃度(Minimum InhibitoryConcentration，MIC)。結(jié)果表明，大環(huán)內(nèi)酯類藥物的耐藥率達(dá)100％；β-內(nèi)酰胺類藥物的耐藥率為0%。
　　 通

3、過卡爾加里生物被膜裝置(Calgary Biofilm Device，CBD)，應(yīng)用結(jié)晶紫染色法和掃描電鏡確定豬鏈球菌生物被膜的形成周期和形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，在72h，豬鏈球菌生物被膜達(dá)到了成熟階段，豬鏈球菌在生物被膜內(nèi)彼此粘連，形成致密的三維立體結(jié)構(gòu)。分別測定大環(huán)內(nèi)酯類藥物和β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)生物被膜的最低生物被膜抑制濃度(Minimal BiofilmInhibitory Concentration，MBIC)與最低生物被膜清除濃度

4、(Minimal Biofilm EradicationConcentration，MBEC)，結(jié)果顯示，大環(huán)內(nèi)酯類藥物和β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)生物被膜的MBIC和MBEC均比浮游細(xì)菌的MIC高。
　　 大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)豬鏈球菌生物被膜形成干預(yù)作用試驗(yàn)中，在培養(yǎng)豬鏈球菌生物被膜的同時(shí)，分別將OMIC、1/4MIC、1/16MIC大環(huán)內(nèi)酯類藥物加入到菌液中，培養(yǎng)72h后觀察生物被膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，同時(shí)用高效液相色譜儀(High Perfo

5、rmance Liquid Chromatograph，HPLC)檢測豬鏈球菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)(Quorum Sensing，QS)中感受態(tài)刺激肽(Competence-stimulatingpeptide，CSP)的含量。結(jié)果顯示，經(jīng)1/4、1/16MIC藥物處理后的生物被膜結(jié)構(gòu)與OMIC處理組相比，紅霉素和阿奇霉素處理組的細(xì)菌生物被膜結(jié)構(gòu)不存在，但散在粘附著豬鏈球菌；經(jīng)藥物處理后的CSP信號(hào)肽含量與未處理組相比明顯降低(P<0.01)

6、，1/4MIC藥物處理組與1/16MIC藥物處理組之間相比差異不顯著(P>0.05)，未表現(xiàn)出濃度相關(guān)性。而泰樂菌素對(duì)豬鏈球菌生物被膜無干預(yù)作用。
　　 大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)豬鏈球菌成熟生物被膜的破壞作用試驗(yàn)中，使用0MIC、1/4MIC、1/16MIC大環(huán)內(nèi)酯類藥物處理成熟生物被膜后，觀察生物被膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)，同時(shí)使用HPLC測定CSP的含量，結(jié)果表明，經(jīng)各藥物處理后的生物被膜均已經(jīng)不再完整，呈細(xì)碎散在的、沒有規(guī)則的結(jié)構(gòu)：經(jīng)紅霉素和

7、阿奇霉素處理后的生物被膜中CSP的含量與未處理組相比明顯降低(P<0.01)，1/4MIC藥物處理組與1/16MIC藥物處理組之間相比差異不顯著(P>0.05)，未表現(xiàn)出濃度相關(guān)性。然而經(jīng)泰樂菌素處理后的生物被膜中CSP的含量與未處理組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　 通過OMIC、1/4MIC、1/16MIC的紅霉素和阿奇霉素對(duì)生物被膜進(jìn)行干預(yù)后，測定β-內(nèi)酰胺類藥物對(duì)細(xì)菌生物被膜的MBIC和MBEC，結(jié)果顯示，經(jīng)1/4