家蠅蛆粉抗高血脂與動脈粥樣硬化的研究.pdf

1、隨著經濟發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，心腦血管疾病已成為危害人們健康的主要疾病，居各類死亡原因之首。心腦血管疾病的病理基礎是動脈粥樣硬化，而脂類代謝與動脈粥樣硬化密切相關。臨床使用的一些化學合成藥物在治療高血脂與動脈粥樣硬化過程中出現(xiàn)了不容忽視的毒副作用。近年來昆蟲藥物的研究受到重視，本文就家蠅蛆粉抗高血脂與動脈粥樣硬化作用及可能的機制進行初步探討。 研究目的： 1.確定有效的家蠅幼蟲批量誘導的物理方法，富集小分子蛋白。

2、 2.優(yōu)化蠅蛆蛋白粉與殼聚糖的制備工藝，初步探討小鼠對家蠅蛆粉的最大耐受量。 3.探討蠅蛆蛋白粉與殼聚糖抗高血脂作用的最佳配伍及可能的機制。 4.探討蠅蛆蛋白粉與殼聚糖抗動脈粥樣硬化作用的最佳配伍及可能的機制，初步探討家蠅幼蟲提取物對泡沫化巨噬細胞膽固醇外流的影響。 研究方法： 1.家蠅及幼蟲的飼養(yǎng)與批量誘導。待3齡幼蟲化蛹羽化后飼以葡萄糖和水，3天后在籠中放入集卵器收集蠅卵，幼蟲孵出后飼以奶粉、

3、麥麩、酵母粉混合的飼料，待其發(fā)育到3齡時進行收集。以冰冷刺激、熱刺激、冷熱刺激、紫外照射、超聲刺激等方法對幼蟲進行批量誘導，測定各組蛋白含量并進行電泳分析，確定家蠅幼蟲最佳批量物理誘導條件。 2.蠅蛆蛋白粉與殼聚糖的制備及最大耐受量實驗。誘導后的3齡幼蟲勻漿處理，濾液采用冷凍干燥方式來制備蠅蛆蛋白粉，濾渣采用酸堿法制備殼聚糖。將10倍實驗劑量蠅蛆粉與普通飼料混合后制成新的飼料投放給小鼠，觀察其對小鼠生存狀態(tài)的影響。 3.

4、家蠅蛆粉對SD大鼠高脂血癥的預防和治療。預防性實驗：動物分籠飼養(yǎng)一周后隨機分為9個處理組：蛋白粉低劑量組、蛋白粉高劑量組、殼聚糖組、蛋白粉:殼聚糖＝10:1組、蛋白粉:殼聚糖＝20:1組、陽性對照組、陰性對照組、模型組和正常對照組。實驗結束后剖殺全部大鼠，計算肝臟與體重的比值。治療性實驗：高脂溶液灌胃建立高脂血癥模型后，將模型組動物分為3個處理組，實驗周期為25天，后5天停藥觀察血清TC、TG、HDL、LDL指標的反彈情況，觀察抗氧化情

5、況及肝臟病理狀態(tài)。 4.家蠅蛆粉抗動脈粥樣硬化的研究。動物實驗：將模型組的動物隨機分為6個處理組：蛋白粉組、殼聚糖組、蛋白粉:殼聚糖＝10:1組、蛋白粉:殼聚糖＝20:1組、陽性對照組、陰性對照組。實驗結束后觀察血脂變化及抗炎抗氧化效果，對iNOS、eNOS的表達進行RT-PCR鑒定，對胸主動脈與肝臟進行常規(guī)HE染色。家蠅幼蟲提取物對泡沫化巨噬細胞膽固醇外流的影響：高脂血癥大鼠的肝臟勻漿液建立泡沫化巨噬細胞模型，將泡沫化的巨噬細

6、胞分為5個處理組：高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性對照組、陰性對照組和正常對照組，油紅O染色計算各組細胞紅染的面積。 結果： 1.籠養(yǎng)方式獲取的幼蟲足以滿足實驗要求，電泳結果顯示6.5KD以下的小分子蛋白經過誘導后得到富集。各項指標的組間比較結果以冷熱刺激誘導方式為優(yōu)。 2.冷凍干燥法制得的蛋白干粉產率為48.56％±5.36％，酸堿法制得的殼聚糖產率為56.22％±14.35％，脫乙酰度為84.52％±13.

7、56％。最大耐受量實驗中以高于實驗劑量10倍標準飼喂小鼠，發(fā)現(xiàn)雌雄小鼠均無死亡。 3.高血脂預防性實驗：實驗過程中各治療組均能有效的抑制TC、TG、LDL水平的升高及HDL水平的下降，減輕肝臟病理變化，其中以蛋白粉:殼聚糖＝10:1組為最優(yōu)。治療性實驗：治療組可以有效的降低血清TC、TG、LDL水平升高HDL水平，且停藥后未出現(xiàn)反彈。SOD與MDA水平改善，肝臟的病理狀態(tài)得到改善。 4.抗動脈粥樣硬化動物實驗結果：各治療

8、組均能有效的降低血清TC、TG、LDL，升高HDL，各治療組的肝臟指數降低。各治療組SOD活力升高，MDA水平下降，動脈血管的病理狀態(tài)改善，其中以蛋白粉:殼聚糖＝10:1組療效為最優(yōu)。iNOSmRNA治療組表達量降低，而eNOSmRNA表達量提高。 5.家蠅幼蟲提取物對小鼠泡沫化巨噬細胞膽固醇外流影響的結果：脂質圖像分析數據分析顯示，高、中、低劑量組細胞紅染面積均減少，高、中劑量組效果顯著。 結論： 經冷熱刺激誘