人牙髓細(xì)胞在體外增殖和分化潛能的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、保存牙髓活力是牙髓生物學(xué)基礎(chǔ)研究的主要內(nèi)容和牙髓病治療學(xué)發(fā)展的主要目標(biāo)。隨著分子生物學(xué)、組織工程學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展，牙本質(zhì)-牙髓復(fù)合體的再生已展示出誘人的應(yīng)用前景和科學(xué)價(jià)值。 本實(shí)驗(yàn)通過體外培養(yǎng)hDPCs，觀察hDPCs在離體牙髓腔內(nèi)生長和分化情況，以及EDMPs對(duì)hDPCs增殖和分化的影響，以期為組織工程化牙髓的研制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分:人牙髓細(xì)胞體外培養(yǎng) 材料和方法:收集因正畸需要新鮮拔除的前

2、磨牙(18～30歲)，無菌條件下劈冠取出牙髓，采用組織塊酶解法進(jìn)行hDPCs的原代培養(yǎng)。傳代時(shí)制取細(xì)胞爬片，通過HE染色來觀察細(xì)胞形態(tài)，同時(shí)采用細(xì)胞免疫化學(xué)染色對(duì)細(xì)胞來源進(jìn)行鑒定。另外，通過連續(xù)8d細(xì)胞計(jì)數(shù)描繪細(xì)胞生長曲線。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)證實(shí)該細(xì)胞為hDPCs，體外培養(yǎng)生長穩(wěn)定，為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 第二部分:人牙髓細(xì)胞在離體牙髓腔內(nèi)生長和分化的研究 材料和方法:收集新鮮拔除的無齲后牙，截取牙冠，慢球鉆去除髓腔內(nèi)

3、壁的前期牙本質(zhì)層，經(jīng)10％EDTA、19％檸檬酸、75％乙醇處理后接種hDPCs，培養(yǎng)2周后4％多聚甲醛固定，10％甲酸脫鈣約20 d后脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，進(jìn)行HE染色和Masson三色法染色，顯微鏡下觀察。 結(jié)論通過體外培養(yǎng)，hDPCs在牙本質(zhì)表面可以表現(xiàn)為成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞的形態(tài)，為組織工程化牙髓的研制提供參考。 第三部分:牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖和分化的影響 材料和方法:取生長穩(wěn)定的第3～5

4、代細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液后接種至96孔板，分別加入含EDMPs的培養(yǎng)液、礦化誘導(dǎo)液和普通培養(yǎng)液，利用MTT比色法連續(xù)8d檢測hPCs的增殖情況；另取生長穩(wěn)定的第3～5代細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液后接種至25mL培養(yǎng)瓶，分別加入舍EDMPs10ug/mL、含EDMPs1 ug/mL的培養(yǎng)液、礦化誘導(dǎo)液和普通培養(yǎng)液，培養(yǎng)3周后茜素紅染色，觀察hDPCs的礦化情況。 結(jié)論 EDMPs對(duì)體外培養(yǎng)的hDPCs的增殖和分化有一定的作用，為進(jìn)一步探討