滋陰固本方對急性EAE大鼠的防治作用及對脊髓內Nogo-A蛋白表達的影響.pdf

1、　　目的：多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經系統(tǒng)(CNS)常見的自身免疫性疾病,因實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠(EAE)模型的發(fā)病情況及病理生理變化與MS 的表現一致,臨床公認使用 EAE 模型作為 MS 的動物實驗模型,本實驗通過EAE模型的制作,觀察滋陰固本方對急性EAE大鼠脊髓損傷后Nogo-A蛋白表達的影響,結合神經功能損害評分,及脊髓損傷后HE染色的病理變化,進一步探討滋陰固本方對急性 EAE 大鼠脊髓損傷的保護機制,為滋陰固本方的

2、臨床應用提供實驗理論依據。
　　方法：雌性wistar大鼠72只,數字表隨機分為6組：空白組、模型組、激素組、中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組,每組12只。采用新鮮豚鼠脊髓勻漿再加完全弗氏佐劑作為免疫抗原,接種到雌性 waster大鼠四肢真皮足墊下,并注射百日咳原液增加血腦脊液屏障通透性,建立 EAE模型。模型制備成功后觀察各組大鼠體重、飲食量和神經行為學變化并進行相應的評分；行蘇木精-伊紅染色觀察脊髓組織的病理變化；用免疫組化

3、(sp)法檢測脊髓組織中Nogo-A蛋白的表達情況。
　　結果：
　　1.體重及神經行為學評分 空白組大鼠無異常神經行為學改變。EAE模型組大鼠注射免疫抗原后7天左右漸出現飲食量減少、飲水量增加、伴有體重下降、大小便失禁、四肢癱瘓等顯著的神經行為學改變；與模型組相比,激素組及中藥高、中、低劑量組在第9天左右逐漸出現神經行為學的改變,1 4天左右癥狀最為明顯,模型組與各治療組體重變化相比差異有統(tǒng)計學意義( p<0.05)。

4、治療組各組神經行為評分低于模型組,激素組與中藥高、中劑量無明顯差異(p>0.05),中劑量與高劑量相比無明顯差異(p>0.05),模型組與激素組及中藥高、中、低劑量組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2. 病理變化結果 空白組大鼠脊髓組織未見炎性細胞浸潤、髓鞘脫失等改變；模型組大鼠脊髓組織可見明顯的炎性細胞的浸潤,呈袖套樣改變,伴有神經細胞的空泡變性,及神經元的皺縮,血管周圍有髓鞘的脫失,伴有軸索的腫脹、變性及膠質細胞增生

5、,與模型組相比,治療組各組的病理變化都有所改善,炎性細胞數明顯減少,無明顯的細胞變性,髓鞘脫失的病灶明顯減少,脊髓組織細胞排列相對整齊。
　　3. Nogo-A 免疫組織化學結果 Nogo-A 蛋白是軸突再生抑制因子,其陽性表達為棕黃色的物質,位于神經元細胞、少突膠質細胞的胞漿內,在機體的神經系統(tǒng)自我修復時伴隨少突膠質細胞的增生而大量釋放。模型組可見 Nogo-A蛋白的表達呈強陽性,與之相比,激素組與中藥高、中、低劑量 Nogo

6、-A 蛋白的表達相對減少。治療組各組間激素組與中藥高劑量之間無明顯差異( p>0.05),中藥高劑量與中劑量之間有明顯差異(p<0.05),中藥中劑量與低劑量之間有明顯差異(p<0.05)。
　　結論：
　　1.本實驗成功建立了多發(fā)性硬化的動物實驗模型。
　　2.滋陰固本方預防性的治療急性期EAE大鼠,明顯減少了發(fā)病率,延緩了其發(fā)病時間；
　　3.滋陰固本方減輕了EAE大鼠脊髓組織的炎性變化,有效的控制了