p-CREB在抑郁癥發(fā)病中的作用及丙戊酸鈉的抗抑郁機(jī)制.pdf

1、目的：抑郁癥是一種嚴(yán)重的情感障礙性精神病，最新調(diào)查結(jié)果顯示，抑郁癥的終身患病率己上升到3％-7％。抑郁癥已成為一種嚴(yán)重影響人類健康的疾病。在抑郁癥的眾多病因中，應(yīng)激因素現(xiàn)已倍受重視。海馬是應(yīng)激激素作用的主要靶區(qū)，也是介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)的主要中樞。臨床研究發(fā)現(xiàn)重度抑郁癥患者的海馬體積較正常人顯著縮小，并伴有海馬神經(jīng)元的萎縮及突觸數(shù)目的減少。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也同樣證實(shí)，長(zhǎng)期的應(yīng)激可以導(dǎo)致海馬神經(jīng)元的萎縮、變性、甚至凋亡，但在經(jīng)過長(zhǎng)期抗抑郁劑治療之后受損的

2、海馬神經(jīng)元又可以得到修復(fù)，神經(jīng)元突觸可塑性能夠得到提高。在抑郁癥導(dǎo)致海馬神經(jīng)元萎縮的機(jī)制的研究中，環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)原件結(jié)合蛋白(CREB)的作用現(xiàn)已受到廣泛關(guān)注。 環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)原件結(jié)合蛋白(CREB)是一種轉(zhuǎn)錄因子，在被激酶磷酸化后成為有活性的轉(zhuǎn)錄因子(p-CREB)，p-CREB可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄水平，其中包括在神經(jīng)元突觸的可塑性調(diào)解中發(fā)揮著重要作用的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)。由于p-CREB水平的變化可直接影響B(tài)

3、DNF的水平，因此p-CREB亦可以起到突觸可塑性的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激可以導(dǎo)致抑郁模型大鼠的海馬內(nèi)的CREB活性降低，經(jīng)過抗抑郁劑治療后的抑郁癥大鼠海馬內(nèi)的CREB的活性增加。 文拉法辛是一種常用的抗抑郁劑，其療效已得到了臨床上的廣泛的認(rèn)可。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)：文拉法辛能夠明顯改善抑郁癥模型大鼠的行為學(xué)改變并提高海馬中的BDNF水平。丙戊酸鈉作為一種經(jīng)典的抗癲癇藥物，它在控制躁狂發(fā)作方面也有較好的療效。最近的研究發(fā)現(xiàn)：丙戊酸鈉

4、還具有神經(jīng)保護(hù)作用及營養(yǎng)神經(jīng)的療效。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，長(zhǎng)期應(yīng)用丙戊酸鈉可以提高大鼠海馬內(nèi)的CREB活性水平。那么丙戊酸鈉是否能夠改善抑郁癥狀，如果可以，其抗抑郁的作用機(jī)制是否與改變CREB活性水平有關(guān)，目前此方面的研究較少。本研究旨在觀察大鼠海馬內(nèi)p-CREB水平的改變?cè)趹?yīng)激所致抑郁癥的發(fā)病過程中的作用，并探討丙戊酸鈉抗抑郁的作用機(jī)制。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：通過曠場(chǎng)試驗(yàn)及Morris Water Maze(MWM)水迷宮實(shí)驗(yàn)篩

5、選出在兩實(shí)驗(yàn)中成績(jī)相近的雄性SD大鼠(體重200g±20g)28只，隨機(jī)將其分成應(yīng)激組和對(duì)照組，每組14只大鼠。應(yīng)激組每天上午9:00接受包括：冷水游泳(10℃，6min)、禁水(24h)、夾尾(1min)、電擊足底(35V，每隔55s刺激1次，每次持續(xù)5s，共30min)、禁食(24h)、水平搖晃(1次/s，45min)、束縛(2h)共7種不同的應(yīng)激處理，每天選用一種刺激，共持續(xù)21d。對(duì)照組不做處理。在21d應(yīng)激結(jié)束后，每組挑選出8

6、只大鼠進(jìn)行體重測(cè)量及行為學(xué)測(cè)試(包括曠場(chǎng)試驗(yàn)及水迷宮測(cè)試)，每組中剩余的6只大鼠用多聚甲醛灌注取腦，做免疫組化染色，檢測(cè)兩組大鼠海馬內(nèi)p-CREB水平。 實(shí)驗(yàn)二：同樣的方法挑選雄性SD大鼠70只，將其隨機(jī)分成五組，分別為:①生理鹽水組；②20mg/kg文拉法辛組；③50 mg/kg丙戊酸鈉組；④100 mg/kg丙戊酸鈉組；⑤200 mg/kg丙戊酸鈉組，每組14只大鼠。各組大鼠每天上午8:30腹腔內(nèi)注射相應(yīng)的藥物或生理鹽水(劑

7、量1ml/kg)，在注藥30min后接受與實(shí)驗(yàn)一相同的應(yīng)激處理。在應(yīng)激21 d后，每組中隨機(jī)挑選8只大鼠測(cè)量體重并做行為學(xué)測(cè)試，其余6只大鼠進(jìn)行免疫組化染色。 結(jié)果：與對(duì)照組相比，應(yīng)激組大鼠體重明顯降低；行為學(xué)實(shí)驗(yàn)表明應(yīng)激組大鼠的水平運(yùn)動(dòng)及垂直運(yùn)動(dòng)較對(duì)照組明顯減少。應(yīng)激組大鼠的平臺(tái)潛伏期延長(zhǎng)，原平臺(tái)所在象限內(nèi)的空間探索空間時(shí)間顯著縮短，大鼠的空間記憶明顯受損。免疫組化檢測(cè)結(jié)果提示，應(yīng)激組大鼠的海馬：DG區(qū)p-CREB水平顯著下降

8、。在藥物試驗(yàn)中：同時(shí)應(yīng)用文拉法辛的應(yīng)激組大鼠，其體重、自主運(yùn)動(dòng)及空間記憶較生理鹽水組都有明顯改善；同時(shí)大鼠海馬內(nèi)DG區(qū)的p-CREB水平得到了顯著提高。應(yīng)用丙戊酸鈉的應(yīng)激組中，注射200 mg/kg丙戊酸鈉的大鼠，其體重及行為學(xué)結(jié)果較生理鹽水組大鼠均有明顯的改善，海馬DG區(qū)的p-CREB水平亦顯著提高。200 mg/kg丙戊酸鈉組與20 mg/kg文拉法辛組的各檢測(cè)指標(biāo)相比均無顯著性差異。100 mg/kg丙戊酸鈉對(duì)抑郁癥大鼠的行為學(xué)有

9、部分改善作用，對(duì)大鼠海馬DG區(qū)p-CREB水平有所提高，但低于文拉法辛的作用。50 mg/kg丙戊酸鈉組的各檢測(cè)結(jié)果與生理鹽水組相比均無差異性。 結(jié)論： 1.慢性不可預(yù)見性應(yīng)激可以引發(fā)抑郁癥，海馬DG區(qū)的p-CREB水平降低是抑郁癥發(fā)病機(jī)制之一。 2.抗抑郁劑文拉法新可以通過提高海馬DG區(qū)內(nèi)p-CREB的水平發(fā)揮抗抑郁效果。 3.丙戊酸鈉的抗抑郁效果有劑量依賴性，200 mg/kg丙戊酸鈉可以預(yù)防慢性應(yīng)激