OLETF大鼠脂肪組織Chemerin及其受體表達(dá)及羅格列酮干預(yù)的研究.pdf

1、目的:代謝綜合征(Metabolism Sydrome)是一組以腹型肥胖、高血糖(DM或IGR)、血脂異常(高TG和/或低HDL-C)以及高血壓等集結(jié)發(fā)病,嚴(yán)重影響人類健康的臨床征候群。其中糖尿病是由于遺傳因素和環(huán)境因素共同作用而導(dǎo)致的,是最為常見的代謝障礙性疾病。胰島素抵抗是糖尿病發(fā)病的重要因?yàn)?尤其是靶器官脂肪組織成為聯(lián)系肥胖、胰島素抵抗及2型糖尿病的樞紐,脂肪炎癥反應(yīng)學(xué)說也充分證實(shí)多種炎癥因子參與以上疾病的發(fā)生與發(fā)展,新近發(fā)現(xiàn)的分

2、泌蛋白Chemerin由脂肪細(xì)胞分泌并高表達(dá),它通過自分泌途徑作用于自身的受體CMKLR1。CMKLR1是Owman等從人B淋巴細(xì)胞cDNA文庫中分離鑒定出的G蛋白耦聯(lián)受體,它在未成熟的樹突狀細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及脂肪細(xì)胞中高表達(dá)。Chemerin-CMKLR1不僅對脂肪細(xì)胞的分化、脂質(zhì)分解、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、胰島素受體底物-1(IRS-1)的磷酸化起作用,而且通過旁分泌途徑作用于炎癥反應(yīng)細(xì)胞,對脂肪細(xì)胞及脂質(zhì)代謝產(chǎn)生一系列影響。另外Cheme

3、rin基因表達(dá)與PPAR-γ表達(dá)相關(guān),因此羅格列酮可激活PPAR-γ調(diào)節(jié)糖脂代謝,同時(shí)改變Chemerin的表達(dá),最終可改善胰島素敏感性和治療胰島素抵抗。本研究觀察OLETF大鼠脂肪組織中Chemerin和CMKLR1基因表達(dá)水平以及羅格列酮干預(yù)后的變化,深入分析Chemerin和CMKLR1在肥胖、胰島素抵抗和2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的作用,為疾病的闡釋和治療提供新的途徑。
　　 內(nèi)容:采用經(jīng)典的自發(fā)性2型糖尿病OLETF大鼠進(jìn)行

4、造模,選擇4周齡正常非糖尿病LETO大鼠10只為對照組,4周齡OLETF大鼠30只為實(shí)驗(yàn)組,OLETF大鼠在30周后測血糖峰值>16.7mmol/L和負(fù)荷后120 min血糖>11.1 mmol/L者診為2型糖尿病,證實(shí)造模成功的OLETF大鼠20只,后者再隨機(jī)分為羅格列酮干預(yù)組和糖尿病模型組各10只。干預(yù)組從30周齡起以羅格列酮3 mg·kg-1·d-1灌胃,干預(yù)前后每4周行1次OGTT,其余兩組給同體積的蒸餾水灌胃,喂養(yǎng)至42周齡時(shí)

5、分別行胰島素釋放試驗(yàn)和高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗(yàn),然后用2％的戊巴比妥鈉(40 mg·kg-1體重)腹腔麻醉,充分暴露腹主動脈,取血,離心,-20℃?zhèn)浯鏈y血脂；處死大鼠,開腹分別取網(wǎng)膜及皮下脂肪組織,液氮凍存?zhèn)溆?以實(shí)時(shí)熒光定量法(Real-time PCR)檢測網(wǎng)膜及皮下脂肪組織Chemerin及CMKLR1 mRNA的表達(dá)水平。取部分新鮮網(wǎng)膜脂肪和皮下脂肪組織(0.5cm×0.5cm×0.5cm)HE染色,光鏡觀察,并采用Image-

6、Pro Plus Vol6.0計(jì)算單位視野脂肪細(xì)胞平均最大直徑。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)方法:(1)實(shí)驗(yàn)動物造模；(2)ELISA法測定胰島素,酶法測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG),銅離子顯色法測定游離脂肪酸(FFA)；(3)組織中總RNA提取和純化；基因測序；Real time-PCR定量技術(shù)；免疫組化法。
　　 2、統(tǒng)計(jì)方法:采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),所得數(shù)據(jù)以(x)±s表示,服從

7、正態(tài)分布的兩組間均數(shù)比較用配對t檢驗(yàn),多組比較采用單因素方差分析,兩兩比較用Student-Newman-Keuls。
　　 結(jié)果:
　　 1、具有典型肥胖、高血糖、高血脂、高胰島素血癥及糖尿病特征的自發(fā)性2型糖尿病大鼠造模成功。
　　 2、模型組網(wǎng)膜脂肪和皮下脂肪組織Chemerin mRNA表達(dá)水平,較對照組明顯增加,而羅格列酮組其表達(dá)水平降低；模型組網(wǎng)膜脂肪和皮下脂肪組織CMKLR1 mRNA表達(dá)水平,較對

8、照組明顯增加,而網(wǎng)膜脂肪組織中羅格列酮干預(yù)后其表達(dá)水平降低,皮下脂肪組織干預(yù)后無明顯差異；模型組大鼠Chemerin及CMKLR1 mRNA表達(dá)水平,皮下脂肪組織均低于網(wǎng)膜脂肪組織。
　　 3、模型組網(wǎng)膜脂肪及皮下脂肪細(xì)胞平均最大直徑大于對照組,羅格列酮組網(wǎng)膜脂肪細(xì)胞平均最大直徑明顯縮小,但仍大于對照組,而皮下脂肪細(xì)胞平均最大直徑無明顯變化。
　　 結(jié)論:自發(fā)性2型糖尿病大鼠網(wǎng)膜及皮下脂肪組織中Chemerin及CMKL