人支氣管上皮癌變各階段組織的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、摘要f肺癌是全球發(fā)病率、死亡率均較高的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人類的健康和生命。按其組織學(xué)分類以肺鱗癌最常見，而肺鱗癌大多起源于支氣管上皮且是一個多階段的演變過程。在致癌因素作用下，支氣管上皮細胞的癌變過程一般要經(jīng)過基底細胞增生、鱗狀化生，進而在基底細胞增生、鱗狀化生的基礎(chǔ)上進展為不典型增生、原位癌，再發(fā)展為微浸潤癌和浸潤癌?；蚪M學(xué)的研究已發(fā)現(xiàn)支氣管上皮癌變過程中存在染色體和或基因結(jié)構(gòu)與功能的異常，這必然導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平的異?？谝虼薐新

2、興的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究支氣管上皮癌變過程中蛋白質(zhì)表達譜的變化將有可能識別癌變相關(guān)蛋白質(zhì)，對揭示支氣管上皮癌變機制具有重要的理論和臨床意義。!(一)本研究收集、篩選人支氣管正常上皮鱗狀化生、不典型增生和上皮浸潤癌組織的新鮮標本共32例進行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究。首先，摸索、優(yōu)化了支氣管上皮組織的蛋白質(zhì)樣品制備方法，即采用改良的脫氧膽酸一三氯醋酸(DeoxycholateTrichloroaeticAcidDOCTCA)法提純支氣管上皮總蛋白質(zhì)

3、，再用固相pH梯度雙向凝膠電泳技術(shù)分離各階段組織的總蛋白質(zhì)，凝膠經(jīng)銀染顯色后，用工mageMaster2D軟件分析、比較二維聚丙烯酞氨凝膠電泳(twodimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis，2DPAGE)圖譜，識別差異表達蛋白質(zhì)點。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(Matrixassistedlaserdesorptionionization選，發(fā)現(xiàn)前一階段與后一階段兩兩間的差異蛋白質(zhì)

4、點數(shù)分別為31.50士7.6741.00士9.0756.00士8.96.(5)在前后階段的差異點中，隨機取121個蛋白質(zhì)點進行了膚質(zhì)量指紋圖分析，通過數(shù)據(jù)庫查詢鑒定了其中113個蛋白質(zhì)點，功能分析顯示這些差異蛋白質(zhì)涉及細胞生理活動的各個方面，有的參與細胞增生、分化、周期調(diào)控、信號傳導(dǎo)，有的則與細胞相互作用、細胞功能特化有關(guān)，還有的是瘤基因、抑瘤基因的產(chǎn)物，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等密切相關(guān)。(二)為了驗證蛋白質(zhì)組分析結(jié)果的可靠性，應(yīng)用免疫組化

5、技術(shù)、WesternBlot分析對幾個差異蛋白質(zhì)(EGFRcJunMdm2JNK3)的表達水平進行了檢測，其中正常支氣管上皮、鱗狀化生、上皮浸潤癌組織各15例，不典型增生12例，結(jié)果顯示EGFR在不同階段組織中均有不同程度的陽性表達，其表達水平隨病變進展而顯著上調(diào)cJun在不典型增生與浸潤癌組織中均有強陽性表達，但其在癌組織中陽性率及強度顯著上調(diào)(P0.05)Mdm2JNK3則僅在癌組織中呈現(xiàn)陽性表達，這表明免疫組化及WesternBl