人表皮光老化的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：人表皮光老化的機制不明。本文以老年人的正常表皮為研究對象，分析曝光部位與非曝光部位的表皮差異蛋白，探討角質(zhì)形成細胞在光老化過程中的作用及分子機制，為揭示衰老的本質(zhì)，指導(dǎo)皮膚美容奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：收集老年人曝光部位和非曝光部位的正常皮膚，液氮保存。37℃生理鹽水中快速復(fù)溫，用DispaseⅡ分離出表皮，提取表皮總蛋白質(zhì)，并進行2-DE分離，獲得表皮雙向凝膠電泳圖譜，PDQUEST軟件進行圖像分析，經(jīng)強度校正、背景消減、

2、點檢測、匹配、ID校正，確定凝膠上差異蛋白點，挑選其中的蛋白點進行MALDI-TOF質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫查詢，鑒定差異表達蛋白；最后用Western-blotting檢測不同部位蛋白的表達情況，驗證差異表達蛋白。
　　 結(jié)果：本課題成功建立和優(yōu)化了人表皮雙向電泳技術(shù)，獲得了清晰、重復(fù)性高的表皮雙向電泳圖譜。經(jīng)PDQUEST軟件分析后，曝光組表皮蛋白質(zhì)點數(shù)為536±17，非曝光組表皮蛋白質(zhì)點數(shù)為528±15，比較兩組圖譜共確定差異點3

3、1個，其中15個蛋白點在曝光組中高表達，5個點特異表達；8個蛋白點在非曝光組中高表達，3個點特異表達。取其中差異明顯的10個點進行質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫查詢，成功鑒定了5個差異表達蛋白，發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白27（HSPB1）、膜聯(lián)蛋白A2（ANXA2）、絲裂原激活的蛋白激酶3（MK03）在老年人曝光部位的表皮中高表達，角蛋白80（K2C80）僅在老年人曝光部位表皮中表達，而谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A2（GSTA2）在非曝光部位表皮中高表達，并通過Weste