哮喘小鼠氣道重塑過(guò)程中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17細(xì)胞表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的:測(cè)定氣道重塑哮喘小鼠Th17細(xì)胞、CD4+CD25+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在脾組織中表達(dá)水平及TGF-β1、smad2、smad7蛋白在肺組織中表達(dá)情況，分析他們變化的規(guī)律及其與氣道重塑的關(guān)系;Th17細(xì)胞、 CD4+CD25+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與肺組織中TGF-β1、smad2、smad7蛋白表達(dá)的相互關(guān)系，探討哮喘氣道重塑發(fā)生過(guò)程中的免疫紊亂機(jī)制為臨床進(jìn)一步研究哮喘更好的防治措施提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法:隨機(jī)選取SPF

2、級(jí)雌性Balb/c小鼠48只，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為兩組，模型組在0、14天每只小鼠腹腔注射雞卵清蛋白和氫氧化鋁混懸液0.2ML致敏，而空白對(duì)照組給予等量的生理鹽水腹腔注射致敏，至第21天開始模型組給予5％雞卵清蛋白混懸液霧化激發(fā)，約30分鐘，隔天一次;空白對(duì)照組給予等量的生理鹽水霧化激發(fā)。兩組分別在霧化2周、4周及8周后的24小時(shí)內(nèi)每組隨機(jī)處死小鼠8只取左肺及脾組織備用，肺組織石蠟切片HE染色觀察肺組織氣道重塑程度;應(yīng)用免疫組化法測(cè)T

3、GF-β1、smad2、smad7蛋白在肺組織中的表達(dá)情況;流式細(xì)胞儀測(cè)Th17、 CD4+CD25+Treg細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的百分比在脾組織中的動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)果:
　　(1)小鼠經(jīng)OVA霧化激發(fā)后會(huì)出現(xiàn)一系列哮喘急性發(fā)作的癥狀如:煩躁不安或少動(dòng)、騷鼻子、口唇發(fā)紺、呼吸增快或呼吸困難、毛發(fā)豎起、腹肌痙攣、點(diǎn)頭呼吸、二便失禁等。病理學(xué)可見各組哮喘模型組支氣管壁及血管周圍大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，部分細(xì)支氣管上皮細(xì)胞脫落不全，基底

4、膜增厚，平滑肌細(xì)胞增生肥大，杯狀細(xì)胞增生;激發(fā)2周后模型組支氣管總管壁的面積(Wat/P bm)開始增厚(P＜0.01)4周增厚明顯、8周增厚最為顯著(p＜0.01);激發(fā)4周后模型組支氣管平滑肌面積(Wam/Pbm)開始增加(P＜0.01)，8周增加最為顯著(P＜0.01)。
　　(2)隨著激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)小鼠脾組織細(xì)胞懸液中Th17細(xì)胞數(shù)水平在逐漸升高，與哮喘氣道重塑的程度呈正相關(guān)(p＜0.01);而隨著激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)小鼠脾組織

5、細(xì)胞懸液中CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)水平在逐漸降低，與哮喘氣道重塑程度均呈負(fù)相關(guān)(p＜0.01)。
　　(3)小鼠肺組織免疫組化染色中smad2、smad7、TGF-β1蛋白陽(yáng)性表達(dá)為淺黃色或棕黃色，主要表達(dá)在細(xì)胞漿、細(xì)胞膜和間質(zhì)。smad2蛋白表達(dá)的光密度值較空白對(duì)照組增加明顯(P＜0.01)，且隨激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)在逐漸增加，與哮喘氣道重塑的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)正相關(guān)(p＜0.01); smad7蛋白表達(dá)的光密度值水平較空白對(duì)照組明

6、顯降低，且隨激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸降低與哮喘氣道重塑程度呈負(fù)相關(guān)(p＜0.05);TGF-β1蛋白表達(dá)的光密度值水平隨激發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)變化不明顯，但較其空白對(duì)照組顯著升高(P＜0.01)。
　　(4)哮喘2w組、4w組、8w組小鼠脾臟單核細(xì)胞懸液中Th17數(shù)與小鼠肺組織中smad2蛋白表達(dá)均呈現(xiàn)正相關(guān)，與smad7蛋白表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，與TGF-β1蛋白表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān);哮喘2w組、4w組、8w組小鼠脾臟單核細(xì)胞懸液中CD4+CD25+Tr

7、eg細(xì)胞數(shù)與小鼠肺組織中smad2蛋白表達(dá)均呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，與smad7蛋白表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)，與TGF-β1蛋白表達(dá)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.哮喘小鼠氣道重塑的改變是動(dòng)態(tài)改變過(guò)程，激發(fā)的時(shí)間越長(zhǎng)，哮喘氣道重塑越嚴(yán)重。
　　2.發(fā)生氣道重塑的哮喘小鼠存在TH17細(xì)胞及CD4+CD25+Treg細(xì)胞的表達(dá)異常， TH17細(xì)胞與氣道重塑程度呈現(xiàn)正相關(guān)，而CD4+CD25+Tregreg細(xì)胞及CD4+CD25+Treg/TH

8、17與氣道重塑程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，即激發(fā)時(shí)間越長(zhǎng)，TH17細(xì)胞表達(dá)升高越明顯，CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目降低越明顯，氣道重塑的程度越嚴(yán)重，兩者間免疫失衡可能是哮喘氣道重塑發(fā)生的重要因素之一。
　　3.哮喘氣道重塑小鼠存在TGF-β1及smads蛋白的表達(dá)異常。smad2與氣道重塑程度呈現(xiàn)正相關(guān)，而smad7與氣道重塑程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，TGF-β1與氣道重塑程度呈現(xiàn)正相關(guān);激發(fā)時(shí)間越長(zhǎng)，smad2蛋白表達(dá)升高越明顯，smad7蛋白