富馬酸生產(chǎn)菌株米根霉的菌種選育及培養(yǎng)條件的優(yōu)化.pdf

1、富馬酸是一種重要的有機(jī)化工原料和精細(xì)化工產(chǎn)品,廣泛用于食品、醫(yī)藥、化工、涂料樹(shù)脂、增塑劑等領(lǐng)域.本文以實(shí)驗(yàn)室自行保存的富馬酸生產(chǎn)菌米根霉ZJIJ作為初始菌株,通過(guò)傳統(tǒng)的紫外誘變,結(jié)合簡(jiǎn)單有效的平板篩選,輔以培養(yǎng)基的優(yōu)化,大幅度提高了富馬酸生產(chǎn)菌的產(chǎn)酸能力. 對(duì)出發(fā)菌株的培養(yǎng)基的進(jìn)行了初步優(yōu)化,從而確定了出發(fā)菌株米根霉ZJU搖瓶發(fā)酵最佳培養(yǎng)基(g/l): Glucose 85;KNO<,3> 1.24;KH<,2>PO<,4> 0

2、.16;ZnSO<,4>·7H<,2>O 0.04;MgSO<,4>·7H<,2>O 0.25,10ug/l生物素,15 ml/1甲醇.在最佳發(fā)酵條件下,出發(fā)菌株Rhizopus oryzae ZJU搖瓶發(fā)酵生產(chǎn)富馬酸產(chǎn)量達(dá)到28g/l,比未優(yōu)化前提高了55.6﹪. 建立了適合于產(chǎn)酸絲狀真菌誘變選育的變色圈平板初篩法,大大降低了誘變育種后高產(chǎn)菌株選育的工作量.以實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)藏的米根霉作為出發(fā)菌株,初始富馬酸產(chǎn)量為28g/l,經(jīng)UV反

3、復(fù)誘變處理后,應(yīng)用上述方法篩選得到了一株富馬酸高產(chǎn)菌株一米根霉ZJU11,在出發(fā)菌株的最佳發(fā)酵條件下富馬酸產(chǎn)量為57.3g/l,,比原始菌株提高了105﹪,富馬酸轉(zhuǎn)化率(產(chǎn)量/耗糖)達(dá)到了67.4﹪.對(duì)突變菌株的培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)突變菌株和原始菌株最佳培養(yǎng)基組成相似,最佳培養(yǎng)溫度為35℃,初始搖床轉(zhuǎn)速100rpm,到大量產(chǎn)酸時(shí)轉(zhuǎn)速升至200rpm.培養(yǎng)基中需要加入0.6g碳酸鈣以控制pH值. 在5 L發(fā)酵罐上分別研究了米根霉