FOXP3在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及預后研究.pdf

1、目的
　　 本研究旨在探索彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuselargeBcelllymphomaDLBCL)腫瘤組織（瘤內和瘤周）中FOXP3蛋白的表達情況，分析其在不同病理亞型中的表達差異，并探討腫瘤細胞內及瘤周FOXP3陽性細胞的預后意義。
　　 方法
　　 回顧性分析經天津市腫瘤醫(yī)院確診的164例DLBCL患者的完整資料。分析其性別、年齡、ECOG評分、AnnArbor分期、IPI評分、骨髓是否累及、B癥狀

2、有無、結外受累數(shù)目、血乳酸脫氫酶(LDH)數(shù)值、治療模式、病理亞型（生發(fā)中心來源GCB與非生發(fā)中心來源non-GCB）等臨床資料。以CD20作為DLBCL腫瘤細胞的標記，以FOXP3作為FOXP3+Tregs的細胞標記，采用免疫組化及免疫熒光雙染色方法檢測腫瘤細胞內和瘤周組織中FOXP3蛋白的表達，分析CD20和FOXP3蛋白的表達與DLBCL臨床病理特征及病理亞型的關系，以及其對患者預后的影響。采用實時定量PCR、WesternBlo

3、t方法檢測不同病理亞型的DLBCL細胞系中FOXP3的表達情況。
　　 結果
　　 1、通過免疫組化，我們發(fā)現(xiàn)FOXP3、CD20蛋白在DLBCL組織中呈不同程度的陽性表達。DLBCL組織癌巢中FOXP3多呈彌漫、散在分布，未見明顯的密集趨勢。癌旁組織中FOXP3+Treg細胞呈少量散在分布，無淋巴樣聚集。DLBCL癌巢中CD20呈明顯的密集趨勢;癌旁組織中CD20陽性細胞呈稀疏散在分布，并且呈淋巴樣聚集。
　　

4、 2、免疫熒光雙染色中，CD20抗體標記DLBCL腫瘤細胞膜呈綠色熒光;FOXP3抗體標記FOXP3+陽性細胞核呈紅色熒光。同時被綠色熒光和紅色熒光標記的細胞為FOXP3陽性的DLBCL細胞，僅被紅色標記細胞核的細胞為腫瘤間質中散在的FOXP3+Treg細胞。FOXP3蛋白在DLBCL瘤內與癌旁組織中表達率之間的差異具有統(tǒng)計學意義(x2=3.29，P=0.02)。FOXP3蛋白在GCB、non-GCB亞型瘤內的表達之間的差異具統(tǒng)計學意義

5、(P＜0.05)。
　　 3、腫瘤內(CD20+組織)高密度FOXP3+表達與多種不良的臨床病理學特征之間關系密切，包括與DLBCL分期較晚(P=0.031)、結外受累(P=0.046)、IPI(3-4分)(P=0.050)non-GCB分型(P=0.021)有關。而瘤內(CD20+組織)高FOXP3+表達與患者的性別、年齡、LDH水平、以及骨髓受累無關(P＞0.05)。相反的是，瘤周(CD20-組織)中FOXP3+Treg細胞

6、與彌漫大B細胞淋巴瘤較好的臨床病理特征顯著相關性，如正常的LDH(P=0.039)、較少的結外受累(P=0.041)、IPI（0-2分）(P=0.024)，GCB分型(P=0.048)。
　　 4、FOXP3蛋白的表達與DLBCL患者OS及PFS的關系:
　　 年齡（P=0.023）、結外受累(P=0.032)和IPI評分(P=0.047)、GCB與non-GCB亞型等(P=0.041)指標與總生存時間(OS)呈顯著負相

7、關。用單因素生存分析瘤內和瘤周CD20+和FOXP3+細胞與OS之間的關系可見:GCB組和non-GCB組瘤內FOXP3+細胞數(shù)目與OS均呈顯著負相關(P＜0.05）;然而值得注意的是，GCB組和non-GCB組瘤周FOXP3+細胞的數(shù)目與OS卻呈顯著正相關（P＜0.05）。
　　 用單因素生存分析患者的結外受累(P=0.033)和分期(P=0.041)、病理亞型(P=0.045)與PFS呈顯著正相關。對于FOXP3陽性細胞的預

8、后意義，用單因素生存分析瘤內及瘤周FOXP3+細胞與PFS之間的關系均無顯著相關性(P＞0.05)。
　　 5、多因素預后分析:GCB與non-GCB亞型(P=0.046)、瘤內FOXP3蛋白的表達情況(P=0.029)是影響DLBCL患者OS的獨立因素。
　　 6、通過RT-PCR證實DLBCL細胞系LY-3、LY-7細胞中存在不同程度FOXP3的轉錄。經免疫印跡實驗，我們發(fā)現(xiàn)DLBCL細胞系LY-3、LY-7細胞中存

9、在不同程度FOXP3蛋白的表達。其中LY-3與LY-7之間FOXP3的表達差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論
　　 FOXP3在彌漫大B細胞淋巴瘤組織中的預后意義取決于FOXP3的分布及密度。瘤內FOXP3+的腫瘤細胞數(shù)量是彌漫大B細胞淋巴瘤總生存的獨立預測指標，并且與DLBCL中GCB與non-GCB分型及其預后相關，為臨床提供分層的、更加個體化的預后預測和治療方案，尤其是對于預后較差的non-GCB型彌漫大B細胞淋巴瘤