MicroRNA-21在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過檢測(cè)DLBCL患者腫瘤石蠟組織及DLBCL細(xì)胞系CRL-2630中miR-21的表達(dá)水平并探討其與DLBCL患者臨床特征之間的關(guān)系，以為DLBCL的臨床診斷及預(yù)后判斷提供信息。通過下調(diào)DLBCL細(xì)胞系CRL-2630的miR-21表達(dá)水平判斷其對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的影響，探討miR-21能否成為DLBCL基因治療的侯選靶點(diǎn)。最后對(duì)腫瘤組織及腫瘤細(xì)胞中對(duì)miR-21與PTEN的關(guān)系進(jìn)行研究，進(jìn)一步探討其致癌機(jī)制。
　　方法：課題

2、分兩部分進(jìn)行:第一部分采用Real time RT-PCR方法檢測(cè)26例DLBCL患者腫瘤石蠟組織和10名正常淋巴結(jié)對(duì)照組中miR-21表達(dá);彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系CRL-2630與正常對(duì)照組4例正常人外周血淋巴細(xì)胞miR-21表達(dá)水平測(cè)定，并對(duì)腫瘤石蠟組織miR-21水平與患者臨床特征進(jìn)行臨床意義分析。第二部分培養(yǎng)DLBCL細(xì)胞系CRL-2630，采用電穿孔方法轉(zhuǎn)染miR-21反義寡核苷酸(AMO-21)抑制miR-21，Real

3、time RT-PCR方法檢測(cè)抑制率，使用Annexin-Ⅴ法流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞凋亡率變化。對(duì)26例DLBCL患者腫瘤石蠟組織及10名正常對(duì)照組采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)PTEN表達(dá)，WesternBlot檢測(cè)腫瘤細(xì)胞系轉(zhuǎn)染前后PTEN蛋白表達(dá)差別。
　　結(jié)果：(1) miR-21在DLBCL腫瘤石蠟組織中相對(duì)表達(dá)量(-△△Ct)為2.70(0.13，5.25)高于正常淋巴結(jié)對(duì)照組-0.34(-1.51，1.39)，是對(duì)照組8

4、.45倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。miR-21在DLBCL細(xì)胞系CRL-2630中的表達(dá)較正常對(duì)照組升高。miR-21高表達(dá)與DLBCL血清LDH呈正相關(guān)(p＜0.05)，Ⅲ/Ⅳ期患者miR-21表達(dá)水平明顯高于Ⅰ/Ⅱ期患者(p＜0.05)，與GCB/ABC臨床亞型無關(guān)(p＞0.05)。(2) CRL-2630細(xì)胞系轉(zhuǎn)染AMO-21后48小時(shí)腫瘤細(xì)胞凋亡水平(16.25％±1.60％)較陰性對(duì)照組腫瘤細(xì)胞凋亡水平(10.30％

5、±1.49％)增高(p＜0.05)，免疫組化法檢測(cè)腫瘤標(biāo)本發(fā)現(xiàn)26例DLBCL中有6例PTEN陽(yáng)性(23％)，DLBCL患者腫瘤組織中miR-21表達(dá)水平與PTEN蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞PTEN蛋白表達(dá)升高。
　　結(jié)論：(1) miR-21在DLBCL中表達(dá)升高，miR-21過表達(dá)可以被認(rèn)為是淋巴瘤診斷的分子標(biāo)志，可以通過Real time RT-PCR方法檢測(cè)其表達(dá)水平，協(xié)助DLBCL的臨床

6、診斷。(2) miR-21表達(dá)和LDH水平及臨床分期成正相關(guān)，與病理分型沒有相關(guān)性，其高表達(dá)可提示DLBCL患者的不良預(yù)后。轉(zhuǎn)染AMO-21可以有效抑制miR-21的表達(dá)，增加抑癌基因PTEN蛋白表達(dá)，Pten基因可能是miR-21作用的靶基因。(3)轉(zhuǎn)染AMO-21有效抑制miR-21表達(dá)后，可以增加腫瘤細(xì)胞凋亡率，反義miRNA寡聚核苷酸轉(zhuǎn)染技術(shù)是一項(xiàng)有效的基因沉默技術(shù)，具有臨床應(yīng)用前景，miR-21可成為DLBCL基因治療的侯選靶