基于熱休克蛋白的MUC1治療性疫苗的研究.pdf

1、MUC1是Mucins粘蛋白中的一種，存在于正常腺管上皮及其來源的腫瘤細胞表面。它是一種大分子的糖蛋白，由多肽核芯和側(cè)枝糖鏈構(gòu)成，其多肽核芯的胞外段含有20個氨基酸的串聯(lián)重復序列(Variablenumberstandemrepeats，VNTRs)。在多種腫瘤中，MUC1異常表達，主要表現(xiàn)為表達量增高，細胞表面極性分布的改變和結(jié)構(gòu)改變等，成為免疫細胞攻擊的靶點。研究發(fā)現(xiàn)MUC1核芯肽的PDTRP表位不僅能被MUC1抗體識別，而且也能被

2、CTL細胞識別和殺傷，且不受MHC的限制。由于MUC1具有上述特點，成為理想的抗腫瘤靶分子。本課題的目的即是開發(fā)一種基于熱休克蛋白的針對非小細胞肺癌(Nonsmallcelllungcancer,NSCLC)的MUC1治療性疫苗。 近年來發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白—多肽復合物可通過受體(CD91)介導的內(nèi)吞作用被巨噬細胞吞噬，然后經(jīng)過蛋白酶體降解，最終進入內(nèi)源性抗原遞呈途徑，從而激活細胞免疫。我們選擇結(jié)核分支桿菌熱休克蛋白65(HSP65

3、)與鼠BP24或人BP25基因融合來作為腫瘤的治療性疫苗。它可以把BP24或BP25蛋白呈遞給MHC-I抗原呈遞途徑，進而激活細胞免疫。 我們通過克隆得到鼠BP24和人BP25基因，構(gòu)建了HSP65-BP24-Ztag和HSP65-BP25-Ztag的pET28a表達載體，并在大腸桿菌中得到了高效表達。目的蛋白經(jīng)硫酸銨沉淀、陽離子層析、疏水層析獲得了純度超過90％的樣品。經(jīng)純化的蛋白作為非小細胞肺癌的治療性疫苗。應(yīng)用HSP65-