基于MUC1糖肽抗腫瘤疫苗的設(shè)計(jì)、合成與免疫評(píng)價(jià).pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的一種疾病，近年來(lái)隨著人們工作壓力的增大和生存環(huán)境的惡化，腫瘤患者逐年增加。腫瘤的免疫療法與傳統(tǒng)的腫瘤治療方案手術(shù)治療、化學(xué)治療和放射治療相比，是一種新興的腫瘤治療方法。它是指機(jī)體運(yùn)用自身的免疫系統(tǒng)來(lái)抑制或殺滅腫瘤細(xì)胞，被認(rèn)為是腫瘤治療領(lǐng)域最有希望治愈腫瘤的一種方法。治療性腫瘤疫苗是腫瘤免疫療法的一個(gè)重要方向，近年來(lái)成為人們研究的熱點(diǎn)。在腫瘤疫苗中，MUC1糖蛋白由于其在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的差異性，成為重要的

2、抗原靶標(biāo)。但是MUC1糖肽抗原的免疫原性較弱，為了增強(qiáng)其免疫原性，需要將其與免疫刺激因子相連。本論文中為增強(qiáng)MUC1糖肽的免疫活性，做了探索性的研究工作。
　　脂多肽FSL-1是Toll樣受體TLR2/6的配體，在體內(nèi)能活化巨噬細(xì)胞，進(jìn)而產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子。研究表明FSL-1和腫瘤相關(guān)抗原一起使用將表現(xiàn)出抗腫瘤活性，而FSL-1單獨(dú)使用有促腫瘤活性。為了增強(qiáng)MUC1糖肽抗原的免疫原性，將FSL-1與MUC1糖肽通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合，合成得

3、到的疫苗表現(xiàn)出很強(qiáng)的免疫活性，并且避免了外源性佐劑的使用。
　　超分子自組裝由于其結(jié)構(gòu)多樣性，在組織工程與藥物傳輸中有很多應(yīng)用。以超分子自組裝多肽Nap-GDFDFDYDK為前體分子，通過(guò)與MUC1糖肽共價(jià)相連，合成得到了自組裝、自身佐劑疫苗。該自組裝多肽在疫苗中既是抗原的多價(jià)載體，也起到了佐劑的效果。
　　α-GalCer是一類可以與CD1d蛋白強(qiáng)力結(jié)合的半乳糖苷脂，被CD1d分子提呈后，繼而與NKT細(xì)胞表面的TCR結(jié)合，

4、誘導(dǎo)細(xì)胞毒性并分泌大量Th1型和Th2型免疫效應(yīng)因子，有效刺激NKT和NK細(xì)胞的增殖，進(jìn)而引發(fā)機(jī)體的一系列免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)。與Toll祥受體激動(dòng)劑相比，具有更強(qiáng)的免疫輔助能力?；贛UC1糖肽抗原自身的免疫原性比較弱，設(shè)想利用糖脂α-GalCer的免疫刺激作用，來(lái)增強(qiáng)MUC1疫苗的免疫原性。為了獲得更好的免疫原性，以金納米顆粒（AuNP）為多價(jià)載體，將MUC1和α-GalCer通過(guò)S-Au鍵強(qiáng)作用力共同連在AuNP上，得到了AuNP為多價(jià)載

5、體的疫苗。免疫結(jié)果顯示，該類疫苗產(chǎn)生了較高的抗體滴度。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)在該類疫苗中抗原與佐劑的比值越高，抗原滴度越高。
　　MUC1糖肽免疫原性較低的一個(gè)重要原因是MUC1來(lái)源于機(jī)體自身，機(jī)體對(duì)其有免疫耐受?；诖?，選取了MUC1串聯(lián)重復(fù)片段的免疫顯性區(qū)域PDTRPAP，設(shè)計(jì)合成其線性三價(jià)糖肽片段，并將其與載體蛋白BSA偶聯(lián)。通過(guò)這種設(shè)計(jì)，會(huì)有以下兩個(gè)作用:一是由于多價(jià)效應(yīng)，線性三價(jià)糖肽可能會(huì)與APC有更強(qiáng)的結(jié)合作用，進(jìn)而取得更好的免疫

6、原性;二是，新設(shè)計(jì)合成的糖肽片段是非天然的，可能會(huì)打破機(jī)體的免疫耐受，進(jìn)而增強(qiáng)其免疫原性。初步免疫結(jié)果顯示，此類疫苗產(chǎn)生了很高的抗體滴度。
　　腫瘤相關(guān)糖抗原（如Tn，TF）的合成是制備腫瘤疫苗的基礎(chǔ)。針對(duì)腫瘤相關(guān)糖抗原合成中遇到的難點(diǎn)，做了一些優(yōu)化性的嘗試。首先針對(duì)化學(xué)合成糖抗原TF及其唾液化的形式，步驟長(zhǎng)，產(chǎn)率低的缺點(diǎn)，運(yùn)用糖的化學(xué)酶法合成策略大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，并提高了產(chǎn)率;其次針對(duì)合成Tn抗原糖苷鍵立體選擇性低的問(wèn)題，發(fā)展