MOG抗體檢測(cè)在多發(fā)性硬化中的臨床意義.pdf

1、中文摘要多發(fā)性硬化(MS)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性炎性脫髓鞘疾病，比較公認(rèn)的觀點(diǎn)認(rèn)為是由于對(duì)髓鞘抗原發(fā)生自身攻擊性免疫應(yīng)答所導(dǎo)致，對(duì)髓鞘抗原的T細(xì)胞和B細(xì)胞免疫應(yīng)答共同參與了疾病的發(fā)生。研究表明髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白〔MOG)很可能是自身髓鞘抗體最初攻擊的靶抗原，MOG抗體(MOGab)與MS的髓鞘脫失有關(guān)。國(guó)外學(xué)者對(duì)MS患者血清及腦脊液中MOGab進(jìn)行了研究，結(jié)果提示在部分MS患者體內(nèi)存在MOGab。我國(guó)ms與西方MS存在差異，MOGab

2、與我國(guó)MS的關(guān)系如何，尚未見(jiàn)有相關(guān)報(bào)道。本研究應(yīng)用基因工程技術(shù)以獲取MOG細(xì)胞外Ig樣結(jié)構(gòu)域(MOGgd)，在此基礎(chǔ)上建立血清和腦脊液MOGab的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，初步探討血清和腦脊液MOGab檢測(cè)對(duì)MS的臨床意義。首先應(yīng)用RTPCR方法，以人腦組織的總RNA為模板擴(kuò)增出編碼MOGgd的cDNA序列，將MOGgdcDNA克隆到硫氧還蛋白(trxA)融合表達(dá)載體PET32a()中，重組質(zhì)粒PET32aMOGgd經(jīng)表型篩選、酶切鑒定及測(cè)序

3、后，轉(zhuǎn)化至BL21(DEB)trxB一宿主菌中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，并通過(guò)金屬鰲合親和層析柱進(jìn)行純化。本研究成功建立了硫氧還蛋白融合表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)MOGIgd融合蛋白的實(shí)驗(yàn)方法，獲取了高純度32KDMOGgdtrxA融合蛋白及21KDtrxA擔(dān)體蛋白。以獲得的MOGgdtrXA融合蛋白及21KDtrxA擔(dān)體蛋白為包被抗原，建立血清和腦脊液MOGab的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，重復(fù)性試驗(yàn)表明本系統(tǒng)具有較好的重現(xiàn)性。然后對(duì)60例MS50例NC23例O

4、IND及29例NIND患者的血清及腦脊液進(jìn)行檢測(cè)，比較分析MS與各對(duì)照組的MOGab水平及陽(yáng)性率分析MOGab水平及陽(yáng)性率同ms臨床表征的關(guān)系并對(duì)42例RRMS患者進(jìn)行隨訪觀察，研究腦脊液MOGab與RRMS復(fù)發(fā)的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腦脊液MOGab水平MS組高于NC組，但MS組與NIND組及OIND組比較無(wú)顯著性差異血清MOGab水平各組間比較無(wú)顯著性差異。MS患者腦脊液MOGab陽(yáng)性率明顯高于NC組和NIND組但與OIND組比較無(wú)顯著性

5、差異各組血清MOGab均為陰性。MS患者腦脊液MOGab水平急性活動(dòng)期高于穩(wěn)定期，ABSTRACTMultiplesclerosis(MS)isaninflammatorydemyelinatingdiseaseofcentralnervoussystem(CNS).AlthoughtheetiologyandpathogenesisofMShavenotbeenestablishedyetitiswidelyacceptedthati

6、mmunologicalmechanismsareinvolved.InthepastdecadesalargebodyofevidenceemergedimplyinganimportantroleofautoreactiveBcellsandantibodiesinMSpatients.Myelinoligodendrocyteglycoprotein(MOG)isaCNSmyelinspecificglycoproteinwhic

7、hisexclusivelyexpressedattheoutersurfaceofmyelinsheathandoligodendrocytemembranewhereasingleimmunoglobulinlikedomain(MOGgd)isaccessibletoantibodiespresentinextracellularspace.AntiMOGantibodies(MOGab)werecapableofcausingd

8、emyclinationinvitroaswellasinvivo.ThereisincreasingstudiesdemonstratedthepresenceofMOGabinseraandcerebrospinalfluid(CSF)ofpatientswithMS.Butinourcountryithasnotbeeninvestigatedyet.InthisstudyweliketoexpresseMOGgdinEcolie

9、xpressionsystemtoestablishenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)ofexaminingMOGabintheserumandCSFandthentoexploretherelationshipsbetweenMOGabandMSclinicalfeaturesThecDANencodedMOG3gdwasamplifiedfrombraintissuebyRTPCRandseq

10、uenced.TheclonedMOGgdcDANwasligatedintothethioredoxin(trxA)fusionexpressionvectorpET32a().RecombinantplasmidwastransfectedintoE.coli.BL21(DE3)trxB“andMOGgdfusionproteinwasinducedwithisopropyl0Dthiogalactopyranoside(IPTG)

11、.The32KDMOGgdtrxAfusionproteinand21KDtrxAproteinwerethenpurifiedbyMetalChelateAfinitychromatography(MCAC).WithMOG“dtrxAproteinandtrxAproteinasantigensELISAwasestablishedandthenweMOGabofpairedseraandCSFsin60MSpatientsSOne