軸索損傷標(biāo)志物在多發(fā)性硬化中的臨床意義.pdf

1、多發(fā)性硬化(MS)巳不再被簡(jiǎn)單地認(rèn)為是一種自身免疫性脫髓鞘疾病，軸突損傷是另一重要的病理特征，而且也是疾病進(jìn)展和神經(jīng)功能障礙累積的促進(jìn)因素。對(duì)MS中軸突損傷機(jī)制的研究可為理解和治療該病提供了新的思路。在MS中引起軸索損傷的具體原因仍并不清楚，但直接針對(duì)軸索細(xì)胞骨架特定成分的破壞過(guò)程可能導(dǎo)致了神經(jīng)功能缺損的累積。神經(jīng)絲(NF)為神經(jīng)元的骨架蛋白。也是呈現(xiàn)軸索損傷的重要生物標(biāo)志物之一。本研究的目的是了解軸索損傷相關(guān)標(biāo)志物檢測(cè)在多發(fā)性硬化(M

2、S)中的臨床意義，并探討其在多發(fā)性硬化發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的可能作用。 本研究由兩部份內(nèi)容組成。　　第一部份系通過(guò)勻漿、脫脂、酸提和電泳純化從牛脊髓組織中制備了MBP；以MBP免疫新西蘭大白兔獲得抗MBP多克隆抗體。將已轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒PET32a-MOGIgd的BL21trxB-宿主菌誘導(dǎo)表達(dá)，并應(yīng)用金屬螯合親和層析柱進(jìn)行純化，獲取高純度的MOGIgd-trxA融合蛋白及trxA擔(dān)體蛋白。為建立相關(guān)生物標(biāo)志物檢測(cè)系統(tǒng)提供必備要素。

3、 第二部份又包括軸索損傷標(biāo)志物測(cè)定系統(tǒng)的構(gòu)建和臨床樣本的測(cè)定和結(jié)果分析兩個(gè)內(nèi)容。 分別以NF-L、MBP的多克隆和單克隆抗體建立起NF-L和MBP的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)。同時(shí)又分別以NF-L、MBP和MOGIgd-trxA融合蛋白及trxA擔(dān)體蛋白為包被抗原，建立起NF-L抗體、MBP抗體和MOG抗體的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明所建立的諸檢測(cè)系統(tǒng)均具有較好的重現(xiàn)性，可以用于臨床樣本分析。以所建立的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)6

4、3例：MS、15例視神經(jīng)脊髓炎(ONM)、31例其他炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病(OIND)、18例非炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病(NIND)和46例神經(jīng)系統(tǒng)正常對(duì)照(NC)的血清和腦脊液樣本進(jìn)行了檢測(cè)，觀察比較MS與各對(duì)照組的NF-L及抗體的水平及其與M=BP、MBP抗體、MOG抗體的相關(guān)性。 測(cè)定結(jié)果顯示，腦脊液(CSF)中各組的NF-L濃度均明顯高于NC組，以目前的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)靈敏度未能檢測(cè)出血清中的NF-L；腦脊液和血清中NF-L抗體的陽(yáng)

5、性率各組均高于NC組；NF-L抗體水平MS組低于OIND，高于NIND和NC組。MS組腦脊液和血清中MBP濃度和MBP抗體的陽(yáng)性率均高于NC組。 其MOG抗體陽(yáng)性率腦脊液中高于NC組，但在血清中與NC組間無(wú)顯著差異。MS患者CSF中NF-L抗體水平與IgG水平和MBP抗體水平顯著相關(guān)。當(dāng)血腦屏障通透性發(fā)生改變時(shí)，腦脊液和血清中MBP濃度存在相關(guān)。軸索損傷現(xiàn)象普遍存在于多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，單一的生物標(biāo)志物檢測(cè)均無(wú)助于對(duì)該病作出特異