IL-17和Nogo-A IgM抗體在多發(fā)性硬化中的作用研究.pdf

1、目的:
　　多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種病因未明的，中青年易發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system，CNS)炎性脫髓鞘性自身免疫性疾病，主要以中樞神經(jīng)系統(tǒng)多發(fā)性白質(zhì)和皮質(zhì)下病灶所導(dǎo)致的復(fù)發(fā)和進展性神經(jīng)癥狀為特征。病理特點為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)血管周圍的淋巴/單核細(xì)胞浸潤，脫髓鞘斑塊形成，反應(yīng)性膠質(zhì)疤痕形成和軸突損傷。MS臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，不同患者和患者不同時期臨床過程和表現(xiàn)有很大

2、的差異。由于MS病因和發(fā)病機制尚未完全清楚，目前無特效性治療。隨著細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，基因技術(shù)的應(yīng)用，深入研究多發(fā)性硬化的發(fā)病機制，探討有價值的生物標(biāo)記進而尋找有效的診斷和治療手段顯得尤為迫切和重要，也是目前神經(jīng)免疫領(lǐng)域里的重要課題。
　　目前認(rèn)為，多發(fā)性硬化是在易感基因的基礎(chǔ)上，受環(huán)境因素的觸發(fā)由CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病。Th1/Th2的平衡介導(dǎo)MS的嚴(yán)重程度及其進展。2005年3月LangrishCL等人

3、報道了新發(fā)現(xiàn)的一類輔助性T細(xì)胞亞群在誘發(fā)EAE中起核心作用，其通過IL-23誘導(dǎo)產(chǎn)生的以分泌IL-17、IL-17F、TNF、IL-6等促炎癥細(xì)胞因子為特征的CD4+T細(xì)胞的分化。這群輔助性T細(xì)胞具有高度的致病性，對EAE的誘導(dǎo)和維持起關(guān)鍵的作用的細(xì)胞亞群被命名為Th17細(xì)胞。Th17分泌的特征性細(xì)胞因子IL-17是一種促炎癥細(xì)胞因子，能夠與多種細(xì)胞因子如TNF-α和IFN-γ等產(chǎn)生協(xié)同作用以放大炎癥反應(yīng)。已有研究表明，在多發(fā)性硬化病人

4、的腦組織、血的單核細(xì)胞以及腦脊液中IL-17mRNA及蛋白的表達均明顯升高，進一步說明IL-17在MS的發(fā)病階段起重要作用。
　　自身抗體反映了自身免疫反應(yīng)的表型、本質(zhì)和強度?？梢宰鳛镸S與其它免疫介導(dǎo)性疾病的診斷、分類、疾病活動性和預(yù)測臨床進程的潛在的標(biāo)記物。在MS病理機制中抗體在免疫病理反應(yīng)（脫髓鞘）的不同階段、促進修復(fù)（如髓鞘再生）和自身免疫反應(yīng)的平衡等各個方面均有不同的生物學(xué)功能。Nogo被認(rèn)為是神經(jīng)生長抑制劑，是一種由R

5、TN4基因編碼的蛋白，在體外重組Nogo蛋白抑制軸突的生長。Nogo-A與MAG和MOG一樣是髓磷脂成分之一，發(fā)現(xiàn)其抑制神經(jīng)元的生長，預(yù)示著在MS中髓鞘破壞的產(chǎn)物抑制了軸突再生。近期發(fā)現(xiàn)，可溶性Nogo-A在MS急性期腦脊液中被發(fā)現(xiàn)，但在緩解期無表達，預(yù)示著在MS的急性期Nogo-A特異性的向腦脊液中擴散。
　　目前的研究已提示IL-17和Nogo-AIgM抗體在自身免疫性疾病的產(chǎn)生和維持中起著至關(guān)重要的作用。因此本課題以多發(fā)性硬

6、化為研究對象，探討IL-17和Nogo-AIgM抗體在復(fù)發(fā)期急性階段多發(fā)性硬化患者外周血清中表達情況，探討二者與MS發(fā)病機制是否相關(guān)，應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法評價IL-17和Nogo-AIgM抗體在MS的表達。以期發(fā)現(xiàn)IL-17與Nogo-AIgM抗體在疾病發(fā)展可能機制，為多發(fā)性硬化的診斷和治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　收集2011年12月～2013年06月中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院神經(jīng)內(nèi)科經(jīng)內(nèi)科就診MS患者共29例，臨床入選標(biāo)準(zhǔn):依

7、據(jù)McDonald多發(fā)性硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)（2010年修訂版）為臨床確診的MS患者，全部處于急性發(fā)作期。對29例MS患者進行空腹采肘靜脈血(5ml)，置于EDTA抗凝管中，放4℃冰箱2h左右分層;3000r/min離心5min，流取上清液。同時隨機選取25例健康志愿者作為對照組，進行空腹采肘靜脈血，留存血樣。
　　帶血樣收集完畢，采用雙抗體夾心法ELISA試劑盒（上海洋紡生物技術(shù)公司）檢測外周靜脈血分離所得血漿中IL-17、Nogo-A

8、IgM抗體的水平。通過對比MS組與健康組血清中IL-17、Nogo-AIgM的表達水平，為揭示MS發(fā)病機制提供了研究方向。
　　結(jié)果:
　　1、MS組患者血清IL-17的水平為(15.496±4.403)pg/ml，對照組IL-17水平為(6.049±0.481)pg/mL;MS組與對照組差異有顯著性意義(p＜0.05)。
　　2、MS組患者血清Nogo-AIgM抗體的水平為(17.759±5.0906)pg/mL，對

9、照組Nogo-AIgM抗體水平為(7.4846±3.15632)pg/mL，MS組與對照組有顯著性差異(p＜0.05)。
　　3、IL-17和Nogo-AIgM抗體變化呈線性趨勢，總體趨勢來看，血清IL-17濃度越高，NogoAIgM抗體濃度也升高，進而應(yīng)用spss19.0軟件，采用偏相關(guān)分析方法，發(fā)現(xiàn)MS患者血清IL-17和Nogo-AIgM抗體之間的偏相關(guān)系數(shù)r=0.480，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.008)，二者呈中度正相關(guān)。

10、
　　結(jié)論:
　　1.MS組與對照組比較，MS組血清IL-17表達水平遠高于對照組，血清中IL-17表達水平與MS發(fā)病情況正相關(guān);
　　2.MS組與對照組比較，MS組血清Nogo-AIgM抗體表達水平遠高于對照組，血清中Nogo-AIgM抗體表達水平與MS發(fā)病情況正相關(guān);
　　3.IL-17和Nogo-AIgM抗體呈線性趨勢，采用偏相關(guān)分析方法，MS患者血清IL-17和Nogo-AIgM抗體之間的偏相關(guān)系數(shù)r=0