抑制LSD1對食管鱗癌中Notch3信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　1.探討食管鱗癌細胞中LSD1激活狀態(tài)及與Notch3信號通路的相互調控關系。
　　2.探討新合成LSD1抑制劑對食管鱗癌細胞增殖的影響及可能的分子作用機理。
　　方法：
　　1.Western blots分別檢測五株分化程度不同的食管鱗癌細胞株KYSE450，KYSE750，EC9706,Eca109，TE1中LSD1及Notch信號通路中Notch1、Notch3、CSL蛋白表達情況。
　　

2、2.熒光定量PCR檢測五株分化程度不同的食管鱗癌細胞株中LSD1 mRNA的表達情況。
　　3.CCK-8法檢測新合成LSD1抑制劑對食管鱗癌細胞增殖的影響。
　　4.分別用LSD1抑制劑（不同濃度和不同時間）處理食管鱗癌Eca109和TE1細胞，Western blots觀察處理前后細胞中LSD1及Notch信號通路中的Notch3、CSL蛋白表達變化情況。
　　5.Western blots檢測不同濃度LSD1抑制

3、劑對ECa109細胞中組蛋白表達的影響。
　　6.Western blots檢測單用Notch通路抑制劑GSI或GSI與LSD1抑制劑聯(lián)用對Eca109細胞中Notch通路蛋白及組蛋白表達影響。
　　7.用LSD1-shRNA下調ECa109細胞中LSD1水平后，Western blots檢測Notch3及凋亡相關蛋白Bcl-2的表達變化情況。
　　結果：
　　1.Western blots結果顯示，LSD1及N

4、otch蛋白在不同的食管鱗癌細胞株中的表達存在差異。在Notch3高表達的食管鱗癌細胞株ECa109中，LSD1也呈現(xiàn)高表達，兩者呈現(xiàn)正相關。
　　2.熒光定量PCR結果顯示，LSD1 mRNA在不同的食管鱗癌細胞株中的表達也存在差異。
　　3. CCK-8結果顯示，LSD1抑制劑處理后，食管鱗癌細胞增殖活性降低。
　　4.LSD1抑制劑處理細胞后，Notch3蛋白的表達水平降低，LSD1蛋白的表達無明顯變化，而組蛋白

5、H3K9me2的表達水平升高，且具有劑量依賴性。
　　5.GSI處理細胞后，Notch3、LSD1、Bcl-2蛋白表達水平降低。
　　6.GSI聯(lián)用LSD1抑制劑后，Notch3、LSD1蛋白及組蛋白H3K4me2表達均明顯降低。
　　7.LSD1-shRNA下調ECa109細胞中LSD1表達后，Notch3及Bcl-2蛋白的表達明顯降低。
　　結論：
　　1.食管鱗癌細胞中均存在LSD1過表達情況，但其表