抑制LSD1對(duì)食管鱗癌中Notch3信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：
　　1.探討食管鱗癌細(xì)胞中LSD1激活狀態(tài)及與Notch3信號(hào)通路的相互調(diào)控關(guān)系。
　　2.探討新合成LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響及可能的分子作用機(jī)理。
　　方法：
　　1.Western blots分別檢測(cè)五株分化程度不同的食管鱗癌細(xì)胞株KYSE450，KYSE750，EC9706,Eca109，TE1中LSD1及Notch信號(hào)通路中Notch1、Notch3、CSL蛋白表達(dá)情況。
　　

2、2.熒光定量PCR檢測(cè)五株分化程度不同的食管鱗癌細(xì)胞株中LSD1 mRNA的表達(dá)情況。
　　3.CCK-8法檢測(cè)新合成LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞增殖的影響。
　　4.分別用LSD1抑制劑（不同濃度和不同時(shí)間）處理食管鱗癌Eca109和TE1細(xì)胞，Western blots觀察處理前后細(xì)胞中LSD1及Notch信號(hào)通路中的Notch3、CSL蛋白表達(dá)變化情況。
　　5.Western blots檢測(cè)不同濃度LSD1抑制

3、劑對(duì)ECa109細(xì)胞中組蛋白表達(dá)的影響。
　　6.Western blots檢測(cè)單用Notch通路抑制劑GSI或GSI與LSD1抑制劑聯(lián)用對(duì)Eca109細(xì)胞中Notch通路蛋白及組蛋白表達(dá)影響。
　　7.用LSD1-shRNA下調(diào)ECa109細(xì)胞中LSD1水平后，Western blots檢測(cè)Notch3及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.Western blots結(jié)果顯示，LSD1及N

4、otch蛋白在不同的食管鱗癌細(xì)胞株中的表達(dá)存在差異。在Notch3高表達(dá)的食管鱗癌細(xì)胞株ECa109中，LSD1也呈現(xiàn)高表達(dá)，兩者呈現(xiàn)正相關(guān)。
　　2.熒光定量PCR結(jié)果顯示，LSD1 mRNA在不同的食管鱗癌細(xì)胞株中的表達(dá)也存在差異。
　　3. CCK-8結(jié)果顯示，LSD1抑制劑處理后，食管鱗癌細(xì)胞增殖活性降低。
　　4.LSD1抑制劑處理細(xì)胞后，Notch3蛋白的表達(dá)水平降低，LSD1蛋白的表達(dá)無明顯變化，而組蛋白

5、H3K9me2的表達(dá)水平升高，且具有劑量依賴性。
　　5.GSI處理細(xì)胞后，Notch3、LSD1、Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低。
　　6.GSI聯(lián)用LSD1抑制劑后，Notch3、LSD1蛋白及組蛋白H3K4me2表達(dá)均明顯降低。
　　7.LSD1-shRNA下調(diào)ECa109細(xì)胞中LSD1表達(dá)后，Notch3及Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論：
　　1.食管鱗癌細(xì)胞中均存在LSD1過表達(dá)情況，但其表