SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣中ICAM-1的表達(dá)變化及ICAM-1單克隆抗體和甲基強(qiáng)的松龍的防治作用.pdf

1、目的：遲發(fā)性腦血管痙攣(DCVS)是引起蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后致死或致殘的主要原因。炎癥反應(yīng)是引起DCVS主要因素之一。最明顯的改變是動脈壁的以中性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤。炎性相關(guān)基因尤其是炎性細(xì)胞因子在痙攣動脈中表達(dá)的增加表明腦血管的炎性反應(yīng)可能是引起持續(xù)性腦血管痙攣的主要原因，并貫穿了從信號轉(zhuǎn)導(dǎo)到血管持續(xù)收縮和動脈壁結(jié)構(gòu)改變這兩個過程。內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1 (ICAM-1)是細(xì)胞膜表面的糖蛋白，主要位于白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，屬

2、粘附分子免疫球蛋白超家族成員。ICAM-1與其配體結(jié)合有助于炎癥和免疫反應(yīng)，并調(diào)節(jié)粒細(xì)胞在組織受損區(qū)域的粘附、穿透和遷移作用，啟動血管壁的炎癥反應(yīng)，加重血管痙攣程度。有研究證實在腦血管痙攣時動脈壁ICAM-1的表達(dá)增高。本研究中我們采用兔枕大池二次注血的腦血管痙攣模型，并應(yīng)用免疫組化和免疫蛋白印跡的方法觀察痙攣動脈中ICAM-1活性表達(dá)的變化，同時應(yīng)用ICAM-1單克隆抗體和甲基強(qiáng)的松龍對SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣進(jìn)行防治，為治療DCVS

3、提供新的思路。 方法：中國白兔48只，體重2～2.5kg，隨機(jī)分為四組。A組：正常對照組(n=8)，不做枕大池穿刺注血，Day0天處死；B組：SAH組(n=24)，采用枕大池二次注血制作SAH模型，即在Day0和Day2第一、二次枕大池注血，并分別在第一次注血后Day4、Day7和Day14分三批處死，每批8只；C組： SAH+ICAM-1 單克隆抗體和甲基強(qiáng)的松龍組組(n=8)，枕大池注射ICAM-1單克隆抗體10μg，耳緣

4、靜脈注射甲基強(qiáng)的松龍30mg/kg，并在Day7處死；D組：SAH+生理鹽水組(n=8)，用等量37℃生理鹽水代替ICAM-1單克隆抗和甲基強(qiáng)的松龍，第一次注血后Day7處死。 HE及免疫組化：麻醉后開胸主動脈灌注(沖洗液：Hanks平衡液pH7.4 37℃ 300ml，固定液：2％多聚甲醛Hanks平衡液pH 7.4 37℃ 200ml)固定后，開顱取含有基底動脈全長的腦干及腦組織，經(jīng) 4％多聚甲醛溶液固定，備組織學(xué)檢查及管徑的測量。

5、 免疫蛋白印跡(Westem Blot)：實驗動物用氯胺酮50mg/kg快速靜推，斷頭處死，剝離基底動脈迅速放入液氮中2分鐘，-70℃冰箱保存。以備Western Blot檢測采用華東理工大學(xué)自動化所細(xì)胞免疫組織化學(xué)分析系統(tǒng)Version 2.0自動分析儀記錄陽性細(xì)胞百分率。各組數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。應(yīng)用AlphMmagerTM 1220Documentation & Analysis system V5.50對

6、免疫印跡結(jié)果進(jìn)行定量分析，其面積灰度值以積分光密度值(IOD)表示，記錄實驗結(jié)果。 應(yīng)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計處理。兩樣本均數(shù)間的比較用 t 檢驗；多樣本均數(shù)間的比較用單因素方差分析，以P<0.05為有顯著差異。 結(jié)論：在兔SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣中ICAM-1表達(dá)在day4開始增加，于day7達(dá)到高峰，之后逐漸下降。與DCVS炎癥反應(yīng)時相相符。應(yīng)用ICAM-1單克隆抗體和甲基強(qiáng)的松龍抑制炎癥反應(yīng)的啟動和進(jìn)展