早期糖尿病腎病(Ⅱ期)大鼠尿液代謝產(chǎn)物的改變及自擬三芪湯干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetic mellitus,DM)最常見和最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一,是導(dǎo)致糖尿病致死率及致殘率升高的主要因?yàn)椤，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識到DN是以腎臟肥大、彌漫性腎小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)增厚、系膜區(qū)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)增加、腎小球彌漫性硬化或結(jié)節(jié)型病變?yōu)橹饕卣鞯哪I小球硬化癥。其

2、發(fā)病是由以持續(xù)高血糖為啟動因素的糖脂代謝紊亂、血流動力學(xué)改變、多種細(xì)胞因子激活及遺傳背景等多因素的綜合作用。但是早期DN起病癥狀隱匿,不易及早發(fā)現(xiàn),待患者出現(xiàn)明顯臨床癥狀,尿蛋白陽性時(shí),病變已進(jìn)展到不可逆的階段。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在治療上仍以去除病因如降糖、降壓、調(diào)脂、合理飲食運(yùn)動等配以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotension converting enzyme inhibitors,ACEI)或者血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑(angiot

3、ensinⅡ receptor blockers,ARB)治療為主。若發(fā)展到終末期腎病(end stage renal disease,ESRD),則主要依賴腎臟移植和透析治療。故本病的早期診斷,及早干預(yù),對阻止DN的進(jìn)展意義重大。
　　 目前,早期DN的診斷手段主要為檢測尿蛋白和尿微量白蛋(urinarymicro albumin,UMA)。但這種方法的不靈敏性難以在DNⅠ～Ⅱ期就作出有效診斷。腎組織穿刺活檢診斷雖然準(zhǔn)確,但這

4、種創(chuàng)傷性方法卻很難在臨床上推廣普及。因此,探索更靈敏、準(zhǔn)確的早期DN的無創(chuàng)診斷方法勢在必行。本實(shí)驗(yàn)通過對早期DN大鼠尿液代謝產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜(highperformance liquid chromatography,HPLC)分析,希望能夠發(fā)現(xiàn)代謝標(biāo)志物,及早對DN作出診斷,進(jìn)行干預(yù),阻止進(jìn)展。
　　 同時(shí)西醫(yī)治療早期DN無特效方法,引導(dǎo)我們將希望轉(zhuǎn)向傳統(tǒng)醫(yī)學(xué),中醫(yī)藥在臨床防治DN上確有一定的療效。DN癥狀與中醫(yī)學(xué)“消渴病

5、”傳變腎消、水腫、尿濁、關(guān)格、虛勞等范疇相類似。早期病機(jī)以氣陰兩虛,瘀血阻絡(luò)為主,虛實(shí)夾雜,互為因果。本實(shí)驗(yàn)遵循中醫(yī)辨證施治的原則,確立益氣活血,標(biāo)本兼治的治療方法,以自擬三芪湯為治療主方,觀察其對早期DN大鼠的干預(yù)作用,發(fā)揮的中醫(yī)治療特色和優(yōu)勢,彌補(bǔ)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療上的不足。
　　 目的:研究早期DN(Ⅱ期)大鼠尿液代謝產(chǎn)物的改變及白擬三芪湯對早期DN(Ⅱ期)大鼠的一般情況、血糖、腎功能、腎組織病理、尿液代謝產(chǎn)物等方面的干預(yù)作用。

6、并通過對尿液代謝圖譜進(jìn)行分析,從代謝組學(xué)的角度探索早期DN無創(chuàng)性診斷方法的可能性和白擬三芪湯對早期DN的干預(yù)效果,為進(jìn)一步研究早期DN尿液標(biāo)志物和深入探討自擬三芪湯作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)選用體重180-200g、健康的雄性Wistar大鼠40只,隨機(jī)分為假手術(shù)組10只,DN模型組和自擬三芪湯治療組各15只。采用右腎切除加腹腔一次性注射鏈脲佐菌素(STZ)法制作早期DN模型,以血糖達(dá)標(biāo)且連續(xù)檢測3天不變者作為入選標(biāo)

7、準(zhǔn)。自擬三芪湯治療組給予自擬三芪湯灌胃,假手術(shù)組和DN模型組給予等量的蒸餾水灌胃。8周后,觀察大鼠一般狀況,取血液、尿液檢測血糖、血肌酐、尿素氮、24小時(shí)尿微量白蛋白,切取左腎進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)(HE染色、PAS染色、電鏡)觀察,并應(yīng)用高效液相色譜儀檢測大鼠尿液代謝圖譜。
　　 結(jié)果:
　　 1.自擬三芪湯能夠明顯改善DN(Ⅱ期)大鼠一般狀況,阻止體重減輕(P<0.01),降低其。腎臟肥大指數(shù)(P<0.01)。
　　

8、 2.自擬三芪湯能夠明顯降低DN(Ⅱ期)大鼠的血糖(P<0.01)。
　　 3.自擬三芪湯能夠明顯改善DN(Ⅱ期)大鼠的血肌酐、尿素氮(P<0.01)。
　　 4.自擬三芪湯能夠明顯減輕DN(Ⅱ期)大鼠腎小球的病理損害。
　　 5.尿液代謝圖譜反映DN(Ⅱ期)大鼠在15min和20min波峰面積Area(A1、A2)及其比值A(chǔ)1/A2,15min和20min波峰高度Height(H1、H2)及其比值H1/H2有明

9、顯的變化(P<0.01)。說明DN(Ⅱ期)大鼠尿液中兩種代謝產(chǎn)物出現(xiàn)了含量變化。自擬三芪湯對上述指標(biāo)有一定的改善作用,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.在DN(Ⅱ期)大鼠尿液中有兩種代謝產(chǎn)物出現(xiàn)了明顯的含量變化,這兩種代謝產(chǎn)物有可能為早期DN的代謝標(biāo)志物,證明通過檢測尿液代謝產(chǎn)物的變化早期診斷DN是可能的。
　　 2.自擬三芪湯可以改善早期DN(Ⅱ期)大鼠一般情況,明顯降低其血糖,保護(hù)其腎