雞致病性大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)、血清型鑒定及耐藥基因的PCR檢測(cè).pdf

1、2006年9月，從山東省某肉雞集團(tuán)的五個(gè)商品雞場(chǎng)，采集了疑似大腸桿菌病、死雞的肝臟、心臟等樣品76份。經(jīng)過細(xì)菌分離培養(yǎng)后，并經(jīng)染色鏡檢、生化試驗(yàn)、致病性試驗(yàn)等鑒定均為致病性大腸桿菌。按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)的判定標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)分離得到的76株大腸桿菌進(jìn)行對(duì)24種常用抗生素及其他抗生素藥物的藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明76株均表現(xiàn)出不同的程度的耐藥性，耐藥范圍較廣，其中，耐藥程度最高的是青霉素和氨芐西林，其次是復(fù)合磺胺、環(huán)丙氟哌酸、四

2、環(huán)素、利福平、萬古霉素、苯唑青霉素、紅霉素，這9種藥物對(duì)76株大腸桿菌低敏或耐藥率達(dá)到100.0％，接下來依次為氟哌酸，氯霉素，呋喃妥因，鏈霉素，卡那霉素，慶大霉素，丁胺卡那霉素，頭孢他啶，頭孢噻肟，頭孢呋新，敏感度最高的僅有頭孢哌酮、頭孢唑啉、頭孢三嗪三種藥物。 血清型的測(cè)定由揚(yáng)州大學(xué)高崧博士協(xié)助完成，結(jié)果在分離得到的76株大腸桿菌中，除各種原因未能定型外，共鑒定出25株分離株的O血清型O41，O78，O29，O76，O5，O

3、14，O104和O63，檢測(cè)結(jié)果表明O41，O78，O29血清型為該肉雞集團(tuán)的優(yōu)勢(shì)血清型，占定型菌株的68.0％。另外，各分場(chǎng)的血清型存有較大差異，而且同一雞場(chǎng)存有多個(gè)不同的血清型。針對(duì)此種情況需要各場(chǎng)根據(jù)自己的優(yōu)勢(shì)血清型的菌株做自家苗進(jìn)行預(yù)防以有效的控制大腸桿菌的發(fā)生。 從分離得到的76株致病性大腸桿菌篩選出耐氨芐西林和四環(huán)素的菌株，針對(duì)β-內(nèi)酰胺和四環(huán)素耐藥基因分別設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物，對(duì)耐藥菌株進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果表明TEM

4、基因陽性45株，占60.0％，CTX-M基因陽性35株，占33.3％，且TEM和CTX-M基因均為陽性高達(dá)23.5％；tetA基因陽性15株，占22.1％，tetD基因陽性23株，占33.8％；β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類交叉耐藥的陽性菌株也占38.2％。此外，耐藥基因測(cè)序結(jié)果分析表明這4種耐藥基因與Genbank中的相關(guān)基因的同源性均高于99.3％，且對(duì)應(yīng)的氨基酸未發(fā)生改變，反映了大腸桿菌的耐藥特性并沒有發(fā)生改變。這說明大腸桿菌耐藥性耐藥譜