新型肝癌細(xì)胞株的建立及其生物學(xué)功能初探.pdf

1、目的:原發(fā)性肝癌是目前常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，因其發(fā)病率高、治療困難、死亡率高，嚴(yán)重威脅全世界人類(lèi)特別是東亞及環(huán)太平洋地區(qū)人民的生命健康。由于肝癌的發(fā)病和轉(zhuǎn)移機(jī)制不能直接在人體上進(jìn)行，所以建立人肝癌細(xì)胞系和人肝癌細(xì)胞系的動(dòng)物模型用于體外或體內(nèi)研究尤為重要。迄今為止，已建立的一系列人肝癌細(xì)胞系為肝癌的發(fā)病機(jī)理和治療研究奠定了良好的基礎(chǔ)。但是由于每一種肝癌細(xì)胞的來(lái)源及生物學(xué)特性不同，而且體外建立的人肝癌細(xì)胞系會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)化，這樣就給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)了不

2、確定性。研究資料顯示現(xiàn)有的人肝癌細(xì)胞系資源還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足研究的需要，所以本課題的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖墙⒁恢陙?lái)源于原發(fā)性肝癌的新型細(xì)胞系，為肝癌的發(fā)病機(jī)制、轉(zhuǎn)移機(jī)制和抗腫瘤藥物的研究提供良好的細(xì)胞模型。
　　 方法:膠原酶消化法對(duì)手術(shù)切除的新鮮肝癌標(biāo)本進(jìn)行原代培養(yǎng);細(xì)胞克隆島擴(kuò)大培養(yǎng)法純化肝癌細(xì)胞;胰蛋白酶消化傳代培養(yǎng)細(xì)胞;細(xì)胞的形態(tài)學(xué)用倒置光鏡觀(guān)察;胎盤(pán)藍(lán)染色法計(jì)數(shù)細(xì)胞凍存后復(fù)蘇的存活率;細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定貼壁率和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn);PCR和We

3、stern-blot法檢測(cè)肝細(xì)胞標(biāo)志物白蛋白(AAT)、α-抗胰蛋白酶(ALB)在細(xì)胞中的表達(dá);流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期和DNA組成;免疫缺陷鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)，計(jì)算異種移植率;常規(guī)制備染色體標(biāo)本，拍照分析核型;DAPI染核法鑒定細(xì)胞系的污染情況;HCVcc（丙肝病毒上清）感染該細(xì)胞，PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)是否有HCV病毒;抗腫瘤藥物TRAIL和索拉菲尼分別處理細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果:成功建立一株新的人肝癌細(xì)胞系，命