骨髓基質(zhì)干細(xì)胞種植入去細(xì)胞同種異體神經(jīng)構(gòu)建獼猴組織工程化神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)將體外分離培養(yǎng)的獼猴BMSCs與去細(xì)胞同種異體神經(jīng)支架復(fù)合，并移植入獼猴橈神經(jīng)缺損處，檢測(cè)BMSCs在體內(nèi)的分化、遷徙及其對(duì)周圍神經(jīng)再生的作用，闡明BMSCs對(duì)修復(fù)獼猴周圍神經(jīng)缺損的重要意義。 第一章：獼猴骨髓基質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)分化為類雪旺細(xì)胞及示蹤研究 1.方法: 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物： 6只3歲雄性獼猴(n=12)，隨機(jī)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組(BMSCs-1aden組，n=6)與對(duì)照組(rlone—cell—la

2、den組，n=6)。 2.BMSCs的分離培養(yǎng)、鑒定及BrdU標(biāo)記： 3.化學(xué)萃取獼猴腓總神經(jīng)、自體BMSCs與去細(xì)胞同種異體神經(jīng)體外復(fù)合并植入體內(nèi)： 4.術(shù)后8周行神經(jīng)電生理檢測(cè)及神經(jīng)移植物的組織形態(tài)學(xué)及免疫熒光檢測(cè)。 結(jié)論： 1.自體骨髓基質(zhì)干細(xì)胞植入獼猴周圍神經(jīng)缺損后，仍可存留于神經(jīng)移植物內(nèi)并保持活性；骨髓基質(zhì)干細(xì)胞可在體內(nèi)誘導(dǎo)分化為類雪旺細(xì)胞并促進(jìn)神經(jīng)再生。 2.骨髓基質(zhì)干細(xì)胞

3、與去細(xì)胞同種異體神經(jīng)復(fù)合物可提供比單純?nèi)ゼ?xì)胞同種異體神經(jīng)更適宜周圍神經(jīng)再生的環(huán)境。 第二章：骨髓基質(zhì)干細(xì)胞與去細(xì)胞同種異體神經(jīng)復(fù)合修復(fù)獼猴橈神經(jīng)2.5cm缺損的實(shí)驗(yàn)研究 方法: 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 15只3歲雄性獼猴(n=30)，體重3.2Kg至4.0Kg，隨機(jī)分為5組，每組6例：BMSCs—laden組;SCs—laden組;autograft組;non—cell-1aden;negative contr

4、ol組。 2.種子細(xì)胞(BMSCs，SCs)的培養(yǎng) BMSCs分離與培養(yǎng)方法如第一章所述。 3.化學(xué)萃取腓總神經(jīng)及自體BMSCs(或SCs)與去細(xì)胞同種異體神經(jīng)體外復(fù)合并植入體內(nèi)切取獼猴腓總神經(jīng)并將其切為3cm長片段進(jìn)行萃取，步驟如第一章所述。萃取后將每段神經(jīng)修剪為2.5am長，放入PBS液中4℃保存。 4.術(shù)后5個(gè)月，觀察神經(jīng)功能恢復(fù)情況，行神經(jīng)電牛理檢測(cè)及神經(jīng)移植物、肌肉組織的形態(tài)學(xué)檢測(cè)。