供體骨髓細胞輸入誘導(dǎo)大鼠異位小腸移植免疫耐受的實驗研究.pdf

1、本課題在大鼠異位節(jié)段小腸移植模型基礎(chǔ)上，采用門靜脈與尾靜脈兩種途徑輸入供體骨髓細胞，從基因水平揭示不同骨髓細胞輸入途徑對誘導(dǎo)大鼠SBT免疫耐受的效果和機制。 目的 :1、建立大鼠異位節(jié)段小腸移植模型，總結(jié)手術(shù)技巧和經(jīng)驗，提高手術(shù)成功率。2、經(jīng)受體大鼠門靜脈和尾靜脈兩種不同途徑輸入供體大鼠的骨髓細胞，觀察這兩種途徑建立的混合嵌合體狀態(tài)對大鼠SBT。免疫耐受的影響，并探討其可能的機制。 方法: 1、建立大鼠異位節(jié)段小腸移植模

2、型：對50只雄性SD、50只雌性Wistar大鼠施行50次異位節(jié)段小腸移植，手術(shù)采用腸系膜上動脈-腹主動脈端側(cè)吻合以及門靜脈-左腎靜脈套管吻合重建供腸血管，遠端腸管腹壁造瘺。 2、取雄性BN大鼠40只為供體、雌性Lewis大鼠40只為受體建立異位SBT模型，隨機分為4組：BN—Lewis組、BN—Lewis+Fk506組、BN—Lewis+BM(Portal iv)+Fk506組、BN—Lewis+BM(Tailiv)+Fk50

3、6組。 3、各實驗組在術(shù)后不同時間點(第0d、3d、7d、14d、21d、30d、60d或90d)觀察大鼠精神和營養(yǎng)狀態(tài)、測定體重變化及生存時間分析，并于術(shù)后第7d，14d，30d、60d或90d制作移植小腸的病理切片評估排斥反應(yīng)程度。 4、分別于術(shù)后7d、14d、21d、30d留取受體血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA)測定血清中IL-2、IL-

4、10水平。并于術(shù)后60d應(yīng)用原位熒光雜交定位檢測以及實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Realtime-Polymerase Chain Reaction，Realtime-PCR)技術(shù)分析供體雄性細胞的SRY(Sex-determining Region of Y chromosome，SRY)基因在移植術(shù)后受體雌性大鼠血液、肝臟及脾臟中的嵌合情況。 結(jié)論:1、注重手術(shù)細節(jié)是成功建立SBT模型的關(guān)鍵；建立恒定、可靠的異位節(jié)段小腸移植模型