HMGB1在MODS小鼠脾臟中的表達(dá)及意義的研究.pdf

1、目前認(rèn)為，多器官功能障礙綜合征(multipleorgansdysfunctionsyndrome，MODS)的發(fā)病基礎(chǔ)是失控性全身炎癥反應(yīng)。最近的研究發(fā)現(xiàn)，高遷移率族蛋白-1(highmobilitygroupbox-1protein，HMGB1)是膿毒癥及脂多糖誘導(dǎo)的致死性全身炎癥反應(yīng)的晚期介導(dǎo)因子，HMGB1有望成為臨床MODS治療的一個(gè)新的有效的干預(yù)靶點(diǎn)。為了明確HMGB1是否可參與不同原因引起的MODS發(fā)病過程、了解MODS病

2、程中HMGB1表達(dá)和釋放規(guī)律、了解MODS病程中免疫器官與HMGB1釋放的關(guān)系及HMGB1與免疫功能狀態(tài)的關(guān)系，我們制作了酵母多糖致小鼠MODS模型，檢測(cè)了病程中血清HMGB1的變化情況，同時(shí)觀察脾臟HMGB1表達(dá)情況及脾臟病理、部分免疫相關(guān)指標(biāo)和脾臟樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)功能狀態(tài)的變化情況，并分析以上變化的時(shí)相關(guān)系，進(jìn)而推測(cè)HMGB1在酵母多糖致小鼠MODS發(fā)病中的作用、脾臟HMGB1表達(dá)的功能意義及HMG

3、B1與免疫功能的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在正常組和病程早期(3-8小時(shí))，HMGB1在血清中幾乎檢測(cè)不到，病情進(jìn)入急性損傷期(12-48小時(shí))時(shí)血清中HMGB1開始升高，很快達(dá)到高峰并維持至急性損傷期結(jié)束，緩解期(5天)又降至正常水平，臟器衰竭期(10-12天)時(shí)再次顯著升高；脾臟HMGB1表達(dá)在致傷后3小時(shí)即開始升高并在8小時(shí)形成一個(gè)小高峰，而在急性損傷期早期表達(dá)水平下降，之后再次升高并在2天時(shí)達(dá)高峰，其水平遠(yuǎn)高于第一個(gè)高峰，緩

4、解期表達(dá)水平下降至接近正常水平，而臟器衰竭期又有升高，但低于2天時(shí)水平。同時(shí)，免疫組化顯示HMGB1的亞細(xì)胞定位有一個(gè)由胞核到胞漿直至細(xì)胞間質(zhì)的變化過程；致傷早期脾臟免疫細(xì)胞增殖活躍，但急性損傷期脾臟可見大量淋巴細(xì)胞凋亡和中性粒細(xì)胞浸潤，緩解期凋亡細(xì)胞減少，臟器衰竭期脾臟免疫細(xì)胞多呈溶3解性壞死及細(xì)胞凋亡；致傷后外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例下降，CD4+/CD8+比值亦隨之降低，緩解期有所恢復(fù)但仍低于正常水平，臟器衰竭期CD4+T淋巴細(xì)

5、胞比例再次急劇降低，CD4+/CD8+比值嚴(yán)重倒置；脾臟及外周血單個(gè)核細(xì)胞Ⅰ-Ab(小鼠MHC-Ⅱ類分子)的表達(dá)也隨病程發(fā)生變化，致傷后8小時(shí)脾臟Ⅰ-Ab表達(dá)陽性細(xì)胞增加但外周血Ⅰ-Ab陽性單個(gè)核細(xì)胞比例下降，急性損傷期脾臟及外周血單個(gè)核細(xì)胞Ⅰ-Ab表達(dá)均顯著降低，緩解期有所恢復(fù)，臟器衰竭期再次顯著降低；致傷后8小時(shí)脾臟中DCs比例升高、功能活躍，急性損傷期時(shí)脾臟DCs比例有所下降，但仍高于正常水平，功能仍活躍，緩解期脾臟DCs比例及激

6、活DCs比例均下降至接近正常水平，臟器衰竭期脾臟DCs含量雖有升高，但多處于失活狀態(tài)。 以上結(jié)果顯示：在酵母多糖致小鼠MODS病程中，脾臟及血清HMGB1的水平發(fā)生規(guī)律性變化，其中在病程的急性損傷期與臟器衰竭期血清HMGB1均顯著持續(xù)升高，與此同時(shí)機(jī)體細(xì)胞免疫功能出現(xiàn)不同程度損傷，表現(xiàn)為脾臟和外周血單個(gè)核細(xì)胞MHC-Ⅱ類分子表達(dá)降低及外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值下降；脾臟HMGB1表達(dá)高峰主要集中在急性損傷期，而臟器衰

7、竭期時(shí)雖有升高但程度有限，脾臟DCs的增殖及激活與脾臟HMGB1表達(dá)升高在時(shí)相上存在一致性。 結(jié)論：1.在酵母多糖致小鼠MODS發(fā)病過程中，脾臟組織及血清中HMGB1含量呈規(guī)律性的伴隨變化，在病程的兩次打擊中均顯著升高，提示HMGB1的滯后釋放使炎癥反應(yīng)得以遷延持續(xù)。HMGB1在炎癥反應(yīng)的持續(xù)發(fā)展、彌漫擴(kuò)散和最終失控的過程中發(fā)揮了重要的介導(dǎo)和維持作用，是造成病情惡性發(fā)展并最終導(dǎo)致MODS的重要因素；2.在本模型急性損傷期，體內(nèi)H

8、MGB1表達(dá)增多主要由免疫細(xì)胞合成釋放，而病程晚期的臟器損傷期即MODS期，損傷及壞死細(xì)胞中HMGB1的釋放和外泄可能成為細(xì)胞外與血清中HMGB1升高的主要來源；3.脾臟HMGB1表達(dá)水平的變化同MODS脾臟病理損傷程度在時(shí)相上4呈一致性趨勢(shì)。免疫細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)的HMGB1既可以釋放于細(xì)胞外間質(zhì)中發(fā)揮自分泌或旁分泌的調(diào)節(jié)方式，又可以釋放入血，參與全身性炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)機(jī)制；4.在MODS病程中，HMGB1可能參與了樹突狀細(xì)胞增生和成熟的調(diào)節(jié)。