泛素在脾臟樹突狀細胞中的表達及其在MODS病程中的作用研究.pdf

1、目的:1.探討MODS時期脾臟樹突狀細胞(DC)中泛素(Ub)的蛋白和基因表達變化及意義。2.研究可能泛素共價結(jié)合到MHC-Ⅱ上使其泛素化從而影響樹突狀細胞(DC)的成熟和活化,為調(diào)節(jié)免疫應答反應提供新的監(jiān)控指標。
　　 方法：通過腹腔內(nèi)注射酵母多糖懸液制成MODS模型,實驗分組:(1)正常對照組(n=30)；MODS組(n=180)并隨機分為6小時、12小時、24小時、48小時、5-7日、12日組；H-E切片觀察各時間點脾臟和

2、心、肝、肺、腎的病理形態(tài)學改變；免疫組化檢測脾臟中泛素蛋白表達；免疫熒光檢測CD86、CD11c、MHC-Ⅱ的表達；通過熒光定量PCR檢測小鼠脾臟內(nèi)泛素基因mRNA表達的變化；流式細胞術檢測脾臟DC免疫表型、外周血單個核細胞MHC-Ⅱ類分子。
　　 結(jié)果:1.泛素蛋白在脾臟DC的表達:在傷后6小時泛素在脾臟DC中的陽性細胞表達數(shù)量增多,傷后12-24小時出現(xiàn)表達數(shù)量持續(xù)增高,24小時達高峰,與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05

3、)。傷后48小時接近正常,5-7天表達升高,10-12天出現(xiàn)表達的顯著下降,與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。熒光定量PCR顯示泛素mRNA在傷后6小時表達增強,12-24小時表達繼續(xù)增強,與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。48小時表達接近正常,10-12天再次出現(xiàn)表達下降,與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2.脾臟DC:用CD11c熒光標記DC,得到DC數(shù)量在6-24小時組明顯增加,48小時開始下降,5-7日接

4、近正常,10-12日DC數(shù)量再次明顯增生；熒光標記MHC-Ⅱ、CD86得到,傷后6小時DC表面分子MHC-Ⅱ、CD86表達增高,12-24小時表達下降,與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05),10-12天MHC-Ⅱ和CD86表達明顯降低,與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.各臟器功能指標:傷后早期(6-12小時)各項指標變化不明顯,急性期(24-48小時)組,實驗鼠功能指標中ALT、BUN、CK升高,有統(tǒng)計學意義。外周血單核

5、細胞對MHC-Ⅱ分子表達減少,病理改變主要為一部分臟器實質(zhì)細胞變性伴間質(zhì)淤血、水腫；傷后5-7日組,實驗小鼠功能指標與臟器病理形態(tài)均有好轉(zhuǎn)。外周血單核細胞MHC-Ⅱ分子表達增加,10-12日,各項臟器指標均顯著上升,外周血單個核細胞MHC-Ⅱ分子表達下降。主要臟器實質(zhì)細胞多呈變性與壞死改變。
　　 結(jié)論:1.MODS中泛素蛋白在小鼠脾臟中的表達變化與臟器病變有密切關系,泛素蛋白在MODS兩次打擊機體功能障礙時呈先升高后下降趨勢。