鹽霉素誘導細胞自噬抑制人胃癌細胞系BGC823增殖.pdf

1、研究背景與目的：
　　 胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，目前無滿意的針對胃癌的輔助化療方案。在小鼠模型中發(fā)現鹽霉素具有特異性抑制乳腺癌干細胞生長及轉移的特性，但其抑制腫瘤細胞生長的潛在機制及對易耐藥胃癌細胞的影響尚無研究。細胞自噬參與多種化療藥物對腫瘤細胞的殺傷機制，本研究旨在研究鹽霉素通過誘導細胞自噬抑制胃癌細胞增殖。
　　 研究方法：
　　 應用MTT法檢測鹽霉素對人胃癌細胞系BGC823的增殖抑制作用，應

2、用倒置顯微鏡和Hoechst33258染色及LC3熒光抗體在熒光顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及LC3表達情況，應用流式細胞儀檢測鹽霉素對胃癌細胞凋亡率的影響及應用3-MA抑制細胞自噬后細胞凋亡率變化情況，應用Westernblotting檢測caspase-3、cleavedcaspase-3、caspase-7、cleavedcaspase-7、caspase-9、cleavedcaspase-9、PARP、cleaved-PARP、LC3的

3、表達水平，應用透射電鏡觀察細胞自噬。
　　 研究結果：
　　 MTT法結果示鹽霉素對胃癌細胞BGC823的增殖抑制作用具有時間-劑量依賴性，24h、48h及72h鹽霉素作用人胃癌細胞BGC823的半數抑制濃度(IC50)分別是42.89μM、19.03μM、17.97μM。鹽霉素作用24h，倒置顯微鏡下觀察，細胞密度降低，大部分細胞變圓脫落，部分細胞固縮，碎裂。熒光顯微鏡下觀察，隨著鹽霉素作用時間延長，細胞質內紅色點狀熒

4、光增加。流式細胞檢測結果示不同濃度鹽霉素(0、7.5μM、30μM)處理24h，細胞凋亡率逐漸增加，但無統計學差異；抑制細胞自噬后，細胞凋亡率明顯降低。Westernblotting檢測示鹽霉素30μM作用12h后cleaved-PARP表達明顯上調，作用2h后即可見LC3Ⅰ轉變?yōu)長C3Ⅱ，未檢測到cleavedcaspase-3表達、cleavedcaspase-7及cleavedcaspase-9無明顯差異。透射電鏡見細胞質內自噬泡