酵母培養(yǎng)物發(fā)酵工藝的優(yōu)化及對(duì)體外培養(yǎng)的影響.pdf

1、本研究用熱帶假絲酵母和釀酒酵母，采取菌種液態(tài)培養(yǎng)-固態(tài)發(fā)酵及液態(tài)發(fā)酵的方法制備酵母培養(yǎng)物，初步摸索了酵母培養(yǎng)物固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)深層發(fā)酵及細(xì)胞破壁的適宜條件，對(duì)細(xì)胞破壁的影響因素進(jìn)行了探討，并進(jìn)行了不同發(fā)酵工藝酵母培養(yǎng)物對(duì)體外培養(yǎng)影響的研究。具體試驗(yàn)及結(jié)果如下： 1.固態(tài)發(fā)酵條件的優(yōu)化 通過(guò)調(diào)整pH值，改變固體培養(yǎng)料的酸度，以培養(yǎng)物活菌數(shù)為評(píng)定指標(biāo)，優(yōu)化固態(tài)培養(yǎng)條件。結(jié)果，培養(yǎng)基pH值為5.5時(shí)，酵母菌生長(zhǎng)最好且抑制雜菌生長(zhǎng)

2、；熱帶假絲酵母和釀酒酵母的活菌數(shù)分別達(dá)137.96億cfu/g和134.62億cfu/g。 2.液態(tài)培養(yǎng)條件的優(yōu)化 (1)采用單因素三水平試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)調(diào)整溫度，觀察酵母菌在不同溫度(26℃、30℃和37℃)下相同時(shí)間內(nèi)的生長(zhǎng)情況，以光電比濁法測(cè)定菌液的光密度為評(píng)定指標(biāo)，確定酵母菌液態(tài)培養(yǎng)的適宜生長(zhǎng)溫度。試驗(yàn)結(jié)果表明，在培養(yǎng)了24h后，溫度30℃的培養(yǎng)菌液的光密度值較其他溫度下的菌液光密度值高，酵母菌生長(zhǎng)好。 (

3、2)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)光電比濁法對(duì)30℃34h內(nèi)的酵母菌培養(yǎng)液每2小時(shí)進(jìn)行一次測(cè)定，以確定酵母菌菌數(shù)達(dá)到最多的生長(zhǎng)時(shí)間。結(jié)果表明，酵母菌30℃恒溫振蕩培養(yǎng)30h時(shí)，生長(zhǎng)達(dá)到最大值。 3.細(xì)胞破壁條件的優(yōu)化 采用3×4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)研究溫度(30℃、40℃、50℃和60℃)、加鹽量(NaCl百分含量為0％、1％、2％和3％)和時(shí)間(20h、24h、28h和32h)對(duì)細(xì)胞破壁的影響，優(yōu)化了細(xì)胞破壁的條件，同時(shí)評(píng)價(jià)了

4、細(xì)胞破壁條件對(duì)維生素含量的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，細(xì)胞破壁的最佳條件為50℃恒溫28h，細(xì)胞破壁率均可達(dá)80％以上，且酵母發(fā)酵液維生素的損失率最低，熱帶假絲酵母和釀酒酵母破壁前后培養(yǎng)物維生素B1損失率分別為8.71％和19.54％，維生素B2損失率分別為19.39％和13.18％，維生素B6損失率分別為6.3％和3.04％。 4.不同工藝酵母培養(yǎng)物對(duì)體外培養(yǎng)的影響 (1)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究不同工藝酵母培養(yǎng)物對(duì)體外培養(yǎng)發(fā)

5、酵特性的影響。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理組，分別為添加達(dá)農(nóng)威益康XP酵母培養(yǎng)物、熱帶假絲固態(tài)培養(yǎng)物、釀酒酵母固態(tài)培養(yǎng)物、熱帶假絲液態(tài)培養(yǎng)物、釀酒酵母液態(tài)培養(yǎng)物的試驗(yàn)組和添加培養(yǎng)底料的對(duì)照組。在發(fā)酵前及發(fā)酵后2h、4h、6h、8h測(cè)定各處理組的纖維素酶活力、氨態(tài)氮濃度和揮發(fā)性脂肪酸含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，添加酵母培養(yǎng)物的各試驗(yàn)組在培養(yǎng)后2-4h可以顯著提高纖維素酶相對(duì)活性(p＜0.05)。與對(duì)照組相比，添加酵母培養(yǎng)物的各試驗(yàn)組均有降低氨濃度的作用，其中達(dá)

6、農(nóng)威XP酵母培養(yǎng)物(2h，6h，8h)、熱帶假絲固態(tài)培養(yǎng)物(4h，6h，8h)、釀酒酵母固態(tài)培養(yǎng)物(6h，8h)、熱帶假絲液態(tài)培養(yǎng)物(6h)和釀酒酵母液態(tài)培養(yǎng)物(6h，8h)，分別在幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)達(dá)到顯著水平(p＜0.05)；其它時(shí)間差異不顯著(p＞0.05)。添加酵母培養(yǎng)物的各試驗(yàn)組都有提高乙酸、丙酸、丁酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量的趨勢(shì)，但差異不顯著(p＞0.05)。 (2)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過(guò)體外培養(yǎng)研究不同工藝酵母培養(yǎng)物對(duì)羊草

7、DM、NDF、ADF降解率的影響。試驗(yàn)設(shè)6個(gè)處理組，分別為添加達(dá)農(nóng)威益康XP酵母培養(yǎng)物、熱帶假絲固態(tài)培養(yǎng)物、釀酒酵母固態(tài)培養(yǎng)物、熱帶假絲液態(tài)培養(yǎng)物、釀酒酵母液態(tài)培養(yǎng)物的試驗(yàn)組和添加培養(yǎng)底料的對(duì)照組。在培養(yǎng)后6h、12h、24h、36h、48h、60h測(cè)定各處理組的DM、NDF、ADF降解率。試驗(yàn)結(jié)果顯示，DM降解率各組間沒(méi)有顯著差異(p＞0.05)。在6～24h，各組間NDF降解率無(wú)顯著差異(p＞0.05)；在36h、48h、60h，與

8、對(duì)照組相比，達(dá)農(nóng)威XP組NDF降解率分別提高了6.1％、10.0％和10.52％，熱帶假絲酵母液培組NDF降解率分別提高了6.6％、9.1％和8.1％，釀酒酵母液培組NDF降解率分別提高了6.8％、6.9％和6.8％，并且達(dá)到差異顯著水平(p＜0.05)。與對(duì)照組相比，添加酵母培養(yǎng)物的各試驗(yàn)組均有提高ADF降解率的趨勢(shì)，但只有達(dá)農(nóng)威XP組(12h，48h)、熱帶假絲酵母液培組(36h)和釀酒酵母液培組(12h，36h)達(dá)到顯著水平(p＜