系統(tǒng)性紅斑狼瘡血管炎相關(guān)自身抗原的血清學篩選.pdf

1、目的：血管炎是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)主要的發(fā)病機制之一。但目前對于與SLE血管炎相關(guān)的自身抗體尚不清楚，不能對其進行早期診斷、及時治療和判斷預后。本研究擬利用SEREX技術(shù)篩選與SLE血管炎相關(guān)的自身抗原，進一步證實SEREX篩選自身免疫性疾病相關(guān)自身抗原(自身抗體)的可行性；通過對篩選出自身抗原的功能分析，找出有助于SLE診斷、治療和判斷預后的自身抗體。 方法：收集四川大學華西醫(yī)院2004年10月至2005年1月SLE住

2、院病人血清作為篩選血清。病例入選標準：(1)符合美國風濕病學會(ACR)1982年制定的SLE診斷標準，且免疫學檢查ANA滴度≥1：320；(2)不伴有感染或者其它自身免疫性疾病。將8例SLE患者的混合血清作為篩選血清。利用人微血管內(nèi)皮細胞cDNA文庫(}tMVEC)，采用SEREX技術(shù)進行血清學篩選。篩選出的陽性克隆經(jīng)內(nèi)部剪切、酶切鑒定及核苷酸序列測定，最后采用NCB工的網(wǎng)上序列分析軟件BLAST進行生物信息學分析。有意義的陽性克隆再

3、分別利用正常人血清和單個SLE病人血清重復篩選一次，以排除假陽性克隆。 結(jié)果：1．第一輪共篩選出18個陽性反應克隆。經(jīng)過第二輪篩選，獲得11個克隆為非自身IgG克隆。2.11個陽性克隆經(jīng)內(nèi)部剪切、酶切鑒定及核苷酸序列測定，最后通過BLAST軟件進行生物信息學分析發(fā)現(xiàn)，11個陽性克隆cDNA序列與3個已知的人類基因序列具有較高的同源性，核苷酸序列相似性分別為95％～99％。3.5個陽性克隆cDNA序列與人類基因序列SSA同源，4個

4、陽性克隆eDNA序列與人類基因序列SSB同源，2個陽性克隆cDNA序列與人類基因序列YB—l同源。其中YB—l尚未被報道過與SLE血管炎相關(guān)。該基因在SLE中的具體功能有待進一步研究。4.利用正常人血清和單個SLE病人血清對YB-1克隆重復篩選一次，排除了YB-l為假陽性克隆的可能性。 結(jié)論：本研究進一步證實SEREX技術(shù)在自身免疫性疾病SLE中的適用性，拓寬了SEREX技術(shù)的應用范圍。篩選出與SLE血管炎相關(guān)的新的自身抗體YB