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文檔簡介
1、目的:佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)家兔用中藥NDRF、甲氨蝶呤(MTX)分別和聯(lián)合給藥,檢測用藥后家兔滑膜組織中MMP-3、VEGF細(xì)胞因子及其相應(yīng)基因的變化,目的是探討中藥NDRF組方及聯(lián)合用藥的治療作用,為中藥及中西醫(yī)聯(lián)合治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供指導(dǎo)。
方法:(1)以弗氏完全佐劑聯(lián)合TNF-α改良誘導(dǎo)注射家兔,制備AA家兔模型。(2)觀察家兔活動、進(jìn)食情況等一般情況和關(guān)節(jié)腫脹情況,測量膝關(guān)節(jié)周徑的變化。(3)采用ELISA法檢測家
2、兔滑膜組織中MMP-3、VEGF細(xì)胞因子的水平。(4)采用RT-qPCR法檢測家兔滑膜組織MMP-3 mRNA、VEGF mRNA的水平。
結(jié)果:(1)家兔致敏前后膝關(guān)節(jié)周徑變化:右膝關(guān)節(jié)周徑注射前9.50cm,第1周后增加至13.25cm,與注射前比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05):左膝關(guān)節(jié)周徑注射前9.52cm,第3周增加至12.08cm,與注射前對比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),關(guān)節(jié)炎指數(shù)大于6。
3、 (2)家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細(xì)胞因子檢測結(jié)果:與正常對照組比較,模型對照組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細(xì)胞因子為13.39(μg/L)、212.00(ng/L)比正常對照組5.91(μg/L)、99.79(ng/L)均明顯增高,有極顯著性差異(P<0.01);與模型對照組比較,中藥NDRF組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細(xì)胞因子含量7.66(μμg/L)、105.35(ng/L)、中藥NDRF+MTX聯(lián)合組5.97(
4、μμg/L)、85.20(ng/L)比模型對照組均明顯降低,有極顯著性差異(P<0.01),西藥MTX組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細(xì)胞因子含量為11.84(μμg/L)、174.95(ng/L)比模型對照組降低,有顯著性差異(P<0.05):與西藥MTX組比較,中藥NDRF組、中藥NDRF+MTX聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細(xì)胞因子含量均低于西藥MTX組,有極顯著性差異(P<0.01);中藥NDRF+MTX聯(lián)合組與中藥N
5、DRF組比較,聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細(xì)胞因子含量均低于中藥NDRF組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。
(3) MMP-3mRNA與VEGF mRNA相對定量統(tǒng)計分析結(jié)果:與正常對照組比較,模型對照組MMP-3 mRNA(2-(△△ct))、VEGF mRNA(2-(△△ct))為2.448、3.050明顯高于正常對照組,有極顯著性差異(P<0.01);與模型對照組比較,中藥NDRF組0.
6、249、1.062,中藥NDRF+MTX聯(lián)合組0.088、0.549比模型對照組均明顯降低,有極顯著性差異(P<0.01),西藥MTX組0.847、2.489,與模型對照組比較有降低,有顯著性差異(P<0.01,P<0.05);與西藥MTX組比較,中藥NDRF組、中藥NDRF+MTX聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGFmRNA相對表達(dá)量均低于西藥MTX組,有極顯著性差異(P<0.01);中藥NDRF+MTX聯(lián)合組與中藥NDRF組比較,
7、聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGFmRNA相對表達(dá)量均低于中藥NDRF組,有極顯著性差異(P<0.01)。
(4) AA家兔滑膜組織MMP-3的含量與滑膜MMP-3mRNA表達(dá)水平有密切的相關(guān)性,且存在顯著正相關(guān)(r=0.655,P<0.01)。
(5) AA家兔滑膜組織VEGF的含量與滑膜VEGFmRNA表達(dá)水平有密切的相關(guān)性,且存在顯著正相關(guān)(r=0.905,P<O.O1)。
結(jié)論:(1
8、)本實驗以弗氏完全佐劑聯(lián)合TNF-α改良誘導(dǎo)注射家兔,制備AA家兔模型,家兔致敏前后膝關(guān)節(jié)周徑變化明顯,關(guān)節(jié)指數(shù)大于6,表明AA模型成功。
(2)中藥組方NDRF及聯(lián)合MTX可降低AA家兔滑膜組織中MMP-3、VEGF細(xì)胞因子的水平;中藥組方NDRF及聯(lián)合MTX可降低AA家兔滑膜組織MMP-3mRNA、VEGFmRNA的水平。通過下調(diào)MMP-3、VEGF水平,更好地抑制致炎效應(yīng)。
(3)本研究初步提示中藥組方
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