內(nèi)皮細胞白細胞黏附分子-1（ELAM-1）對豬眼小梁細胞表達MMP-3及TIMP-1的影響.pdf

1、青光眼是全球主要的致盲眼病，也是我國首位不可逆的致盲性眼病。了解青光眼的發(fā)病機制，對其進行早期診斷、早期治療，是研究青光眼的重點課題。 基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一類鋅離子依賴性內(nèi)源性蛋白水解酶，主要功能是降解細胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜?；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)是MMP天然的抑制劑之一。在人類的小梁網(wǎng)細胞上存在著MMP與TIMP，二者作用的平衡性對正常人眼維持小梁ECM與房水外流通暢十分重要。許多因素可以影響MMP

2、/TIMP的平衡性。而ELAM-1作為目前發(fā)現(xiàn)的唯一的青光眼特異性分子標記，研究其對MMP/TIMP平衡的影響將加深我們對青光眼發(fā)病機制的了解。 在本實驗中，主要研究氧化應激對小梁細胞表達MMP-3及TIMP-1的影響及ELAM-1與抗體結合后對小梁細胞MMP-3/TIMP-1平衡的影響。由此進一步了解ELAM-1在青光眼發(fā)病機制中的作用。實驗分為兩個部分。 一、氧化應激下房水外流通路MMP-3及TIMP-1表達的研究目

3、的：研究氧化應激對小梁細胞表達MMP-3/TIMP-1的影響，了解青光眼小梁細胞MMP/TIMP之間的平衡機制。 方法：將原代培養(yǎng)的豬小梁細胞血清饑餓培養(yǎng)16小時，分成對照組和H2O2組，對照組加入無血清培養(yǎng)基，H2O2組加入新鮮配制的1mmol/L的H2O2，5％CO2培養(yǎng)箱中37℃30分鐘。分別用免疫組化法、ELISA法和RT-PCR法檢測小梁細胞MMP-3及TIMP-1的表達。 結果：以上三種方法顯示對照組MMP-

4、3及TIMP-1表達均為陰性，H2O2組MMP-3及TIMP-1表達均為陽性，MMP-3/TIMP-1平衡未破壞。 結論：本實驗結果表明，氧化應激可以誘導小梁細胞表達MMP-3及TIMP-1，并不破壞MMP-3/TIMP-1平衡關系。 二、ELAM-1對小梁細胞表達MMP-3及TIMP-1的影響目的：通過研究ELAM-1與抗體結合后對小梁細胞表達MMP-3及TIMP-1的影響，進一步了解ELAM-1在青光眼發(fā)病機制中的作

5、用。 方法：將原代培養(yǎng)的豬小梁細胞血清饑餓培養(yǎng)16小時，分為六組：Ⅰ)對照組，不加入任何藥物；Ⅱ)IL-1α組，加入IL-1α刺激；Ⅲ)ELAM-1Ab組，用IL-1α刺激后，再加入ELAM-1Ab;Ⅳ)ELAM-1Ab同時加入組，同時加入IL-1α和ELAM-1Ab；Ⅴ)IgG組，用IL-1α刺激后，加入ELAM-1Ab，再加入IgG交聯(lián)；Ⅵ)IgG同時加入組，同時加入IL-1α、ELAM-1Ab和IgG。對以上六組在相同作用

6、條件下作用后，分別用免疫組化法、ELISA法和RT-PCR法檢測小梁細胞MMP-3及TIMP-1的表達，同時用免疫組化法檢測ELAM-1的表達。 結果：在原代培養(yǎng)的豬小梁細胞中，免疫組化和ELISA法顯示第1組TIMP-1表達為陰性，其余五組TIMP-1表達均為陽性；RT-PCR顯示以上六組TIMP-1表達均為陽性。免疫組化法顯示Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ組的MMP-3表達為陽性，而RT-PCR顯示只有Ⅱ組的MMP-3表達為陽性，其余幾組MMP

7、-3表達均為陰性。另外，免疫組化法顯示Ⅱ組的ELAM-1表達為陽性，其余幾組ELAM-1表達均為陰性。 結論：外源性IL-1α能刺激豬小梁細胞表達ELAM-1、MMP-3和TIMP-1，ELAM-1與抗體結合或進一步與IgG交聯(lián)后可以抑制MMP-3的表達，但不影響TIMP-1的表達，使得MMP/TIMP平衡被破壞。 基于以上兩部分實驗結果，推測ELAM-1與抗體結合后破壞MMP/TIMP平衡可能在青光眼的發(fā)病機制中具有重