HO-1誘導(dǎo)表達(dá)在調(diào)控乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素敏感性中的作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究血紅素加氧酶-1(heme oxygenase，HO-1)在調(diào)控乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素敏感性中的作用及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法：(1)PI染色結(jié)合細(xì)胞流式術(shù)測(cè)定乳腺癌MDA-MB-453和MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)阿霉素的凋亡反應(yīng);(2)利用Western blot檢測(cè)乳腺癌MDA-MB-453和MDA-MB-231細(xì)胞在阿霉素刺激前后HO-1蛋白的表達(dá)水平;(3)采用siRNA介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)阻斷阿霉素對(duì)HO-1的誘

2、導(dǎo)表達(dá)，用細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響;(4)采用細(xì)胞自噬檢測(cè)試劑盒(ENZO)染色，并分別應(yīng)用共激聚焦顯微鏡、細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)細(xì)胞自噬水平;(5)應(yīng)用雙熒光素酶基因檢測(cè)、Western blot等方法檢測(cè)阿霉素刺激STAT3等轉(zhuǎn)錄因子及Src等蛋白激酶的活性變化;(6)應(yīng)用siRNA干擾、Western blot等技術(shù)探討阿霉素誘導(dǎo)HO-1表達(dá)及其影響乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素敏感性的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：阿霉素（0.2μM）刺激48

3、小時(shí)后，MDA-MB-453細(xì)胞凋亡率明顯上升（從1.5％到40％），而MDA-MB-231細(xì)胞的凋亡率較低(從3.29％到13.7％)。Western blot結(jié)果顯示MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)阿霉素刺激后，HO-1蛋白出現(xiàn)了顯著的誘導(dǎo)表達(dá)上調(diào)，而在MDA-MB-453細(xì)胞中并未觀察到此現(xiàn)象。沉默HO-1基因表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞凋亡率顯著上升。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，阿霉素可誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞的自噬水平明顯升高，抑制自噬

4、后MDA-MB-231細(xì)胞凋亡率明顯上升。抑制HO-1基因表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞的自噬水平顯著下降。阿霉素的刺激作用下，MDA-MB-231細(xì)胞出現(xiàn)了STAT3和磷酸化STAT3蛋白表達(dá)上調(diào)，雙熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)分析顯示STAT3的轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)，抑制STAT3的表達(dá)后HO-1蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及細(xì)胞自噬水平均顯著被抑制。在MDA-MB-231細(xì)胞中，阿霉素還顯著誘導(dǎo)Src活化水平上調(diào)，抑制Src的表達(dá)后STAT3轉(zhuǎn)錄活性、HO-