乙肝核酸疫苗小鼠體內(nèi)生物分布及與生殖腺基因組整合可能性的初步研究.pdf

1、該實驗采用<'32>P-乙肝核酸疫苗（<'32>P-HBV DNA）,結(jié)合三氯乙酸（TCA）沉淀,全身放射自顯影和DNA提取后凝膠電泳放射自顯影法研究小鼠肌肉注射乙肝核酸疫苗后在機體內(nèi)的生物分布情況;采用PCR方法研究小鼠肌肉注射非標記乙肝核酸疫苗后與生殖腺基因組的整合情況.結(jié)果表明：（1）質(zhì)粒DNA疫苗除注射局部肌肉分布較多外,其他一些重要組織也有分布,其中腺體組織（腎上腺、胰腺、胸腺）中的濃度最高,其次為排泄物（膀胱、腸內(nèi)糞）,腦組

2、織中濃度最低.表明<'32>P-乙肝核酸疫苗不易進入血腦屏障.生殖器官在給藥早期（10min）也有一定水平分布,但隨時間延長迅速降低.（2）各組織酸可沉淀放射性按AUC從高到低排列依次為胸腺、腎上腺、膀胱、生殖腺、脂肪、腸內(nèi)糞、胰腺、頜下腺、脾、小腸、眼球、肝、腸內(nèi)容、腎、甲狀腺、肺、淋巴結(jié)、對側(cè)肌肉、心臟和腦.（3）組織中提取DNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳,放射自顯影顯示,脛前肌肌注給藥后10min、4hr和24hr肝臟、肌肉及血漿中可見標記

3、乙肝核酸疫苗放射性條帶,4d和7d未觀察到放射性條帶.（4）整體放射自顯影結(jié)果顯示：給藥后10min,心肌、肝臟、肺和腎臟中的放射性濃度分布最高,且放射自顯影灰度由高到低排列為腎臟>肝臟>肺>心肌,其它時間點未觀察到器官或組織特異的高放射性強度區(qū)域性分布.（5）該研究PCR法擴增30個循環(huán)時,最低可清晰見到20拷貝的擴增產(chǎn)物,小鼠給非標記乙肝核酸疫苗2周后生殖腺DNA經(jīng)提取、電泳、上樣孔處條帶膠回收物PCR擴增30個循環(huán)后,未見目的條帶