蒙古羊基因組中EnJSRV分布的初步研究.pdf

1、為研究內(nèi)源性肺腺瘤病毒基因序列(enJSRV)在蒙古羊基因組中的分布，參照內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)在GenBank中發(fā)表的DQ838493基因組全序列、肺表面活性蛋白(SP-A)基因、enJSRV6和enJSRV10的長末端重復(fù)序列(LTR)，設(shè)計合成5對引物，從經(jīng)臨床病理學(xué)檢查健康無病綿羊采靜脈血提取總DNA，利用PCR技術(shù)，以提取的總DNA為模板對SP-A蛋白基因、enJSRV6、enJSRV10的5'和3'端的長末端重復(fù)序列(LTR)基因進

2、行PCR擴增，產(chǎn)物分別為5個(SP-A、enJSRV6-5'、enJSRV6-3'、enJSRV10-5'和enJSRV10-3')特異性基因片段，將其分別克隆入pMD19-T載體中進行雙向測序并用DNAstar軟件進行序列拼接和分析。結(jié)果表明，能被exJSRV插入的SP-A蛋白基因沒有相應(yīng)的enJSRV基因，而內(nèi)源性病毒基因(enJSRV6、enJSRV10)在蒙古羊基因組中有相應(yīng)的插入位點和分布，并通過對內(nèi)源性病毒(enJSRV6、

3、enJSRV10)基因的兩端LTR的分析，顯示蒙古羊的內(nèi)源性肺腺瘤病毒基因具有典型的長末端重復(fù)(LTR)結(jié)構(gòu)，兩端的“U3(R)U5”結(jié)構(gòu)在每個內(nèi)源性病毒基因是相對穩(wěn)定的，并且只有在U3區(qū)是可變區(qū)，R和U5區(qū)是非常保守的。為了進一步研究內(nèi)源性肺腺瘤反轉(zhuǎn)錄病毒(enJSRV)基因在蒙古羊基因組中的分布，利用熒光原位雜交(FISH)技術(shù)，參照enJSRV(DQ838493)基因組中的gag基因，設(shè)計合成一對引物并進行PCR擴增，以克隆純化的