干擾素-τ調(diào)節(jié)妊娠早期奶牛子宮內(nèi)膜BoLA-Ⅰ機(jī)制研究.pdf

1、IFN-τ和BoLA-Ⅰ在奶牛妊娠早期提高母體子宮對(duì)胎兒的容受性，提供子宮內(nèi)免疫抑制環(huán)境，在建立妊娠穩(wěn)定著床等妊娠免疫問題上發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。IFN-τ是反芻動(dòng)物的特征性物質(zhì)，又被定義為抗黃體溶解蛋白，在妊娠早期被胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌。由于從IFN-τ出現(xiàn)到消失的時(shí)間非常短暫，所以有關(guān)IFN-τ在反芻動(dòng)物妊娠早期的特異性調(diào)節(jié)功能還不是很清楚。主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅰ類抗原在妊娠早期發(fā)揮著在胚胎植入時(shí)抑制免疫排斥的作用，在牛被命名為

2、BoLA-Ⅰ。奶牛子宮對(duì)胎兒的容受性和BoLA-Ⅰ密切相關(guān)。IFN-τ調(diào)節(jié)BoLA-Ⅰ的機(jī)制尚不明確，妊娠早期母體-胎兒界面的妊娠免疫問題需要研究。
　　本研究確認(rèn)了胚胎滋養(yǎng)層分泌的IFN-τ通過作用于子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞表達(dá)BoLA-Ⅰ，進(jìn)而調(diào)節(jié)早期妊娠免疫的潛在機(jī)制，主要研究?jī)?nèi)容和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)為了研究妊娠早期的子宮內(nèi)膜變化，我們選取妊娠早期9-20天內(nèi)的三頭奶牛子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行組織學(xué)分析，結(jié)果顯示懷孕早期奶牛

3、子宮內(nèi)膜組織明顯增生變厚，且子宮內(nèi)膜腔上皮之間的間隙增寬、血管增多，有利于胚胎對(duì)子宮內(nèi)膜的侵襲與附著以及生長(zhǎng)和發(fā)育;此際子宮內(nèi)膜幾乎沒有中性粒細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞的出現(xiàn)，說明子宮為接納胚胎提供了良好的免疫內(nèi)環(huán)境。為進(jìn)一步確認(rèn)妊娠早期子宮內(nèi)的免疫抑制環(huán)境，我們用ELISA檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織中的細(xì)胞因子發(fā)現(xiàn)，IL-6表達(dá)顯著下降且IL-10表達(dá)顯著上升，確證了妊娠早期子宮內(nèi)膜的免疫抑制環(huán)境。
　　(2)用qPCR和Western blot研

4、究反芻動(dòng)物妊娠早期標(biāo)志性物質(zhì)IFN-τ和妊娠免疫關(guān)鍵性物質(zhì)BoLA-Ⅰ在妊娠早期的變化發(fā)現(xiàn)，妊娠早期相較于未妊娠奶牛子宮內(nèi)膜組織的IFN-τ和BoLA-Ⅰ的轉(zhuǎn)錄水平顯著提升高，BoLA-Ⅰ蛋白表達(dá)水平亦升高顯著。Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子TRAF3、STAT1和STAT3的磷酸化水平發(fā)現(xiàn)，STAT1和STAT3磷酸化水平提高，而TRAF3的表達(dá)水平降低。
　　(3)運(yùn)用組織塊培養(yǎng)法和差速貼壁分離技術(shù)培養(yǎng)原代子宮內(nèi)膜腔上皮

5、細(xì)胞;通過特異性CK18角蛋白免疫組織化學(xué)和激光共聚焦技術(shù)鑒定上皮細(xì)胞及其純度，傳代后細(xì)胞純度＞99％，成功建立子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞體外模型。
　　(4)為了驗(yàn)證IFN-τ對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞的作用，用不同濃度的IFN-τ處理奶牛子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞，驗(yàn)證以上在妊娠早期子宮內(nèi)膜組織中檢測(cè)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著IFN-τ的增加IL-6表達(dá)下降，而IL-10表達(dá)顯著升高。200ng/mL的IFN-τ顯著上調(diào)BoLA-Ⅰ的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)。

6、STAT1和STAT3的磷酸化水平隨著IFN-τ處理的濃度的增加而顯著提高，而TRAF3的表達(dá)水平隨著IFN-τ濃度增加而顯著降低。IFN-τ處理的奶牛子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞與妊娠早期子宮內(nèi)膜組織的相關(guān)物質(zhì)表達(dá)情況一致。
　　結(jié)論:IFN-τ有利于妊娠早期奶牛子宮內(nèi)的胚胎著床，相關(guān)機(jī)制包括(1)妊娠早期奶牛胚胎滋養(yǎng)層分泌的IFN-τ通過上調(diào)IL-10和下調(diào)IL-6促進(jìn)子宮內(nèi)免疫抑制環(huán)境的形成;(2) IFN-τ增加奶牛子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)