孕期補(bǔ)充DHA對(duì)脂多糖所致的仔鼠腦組織小膠質(zhì)細(xì)胞活化和IL-1β表達(dá)的影響.pdf

1、目的：腦白質(zhì)損傷與腦性癱瘓的發(fā)病密切相關(guān)，腦室周?chē)踪|(zhì)軟化（periventricular leukomalacia，PLV）是腦白質(zhì)損傷的典型病理表現(xiàn)。越來(lái)越多的證據(jù)表明，除缺血缺氧性損傷外，孕母和或胎兒感染也與PLV的形成密切相關(guān)。眾多研究表明細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）干預(yù)圍產(chǎn)期孕鼠可激活母體和胎兒炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)胎兒腦組織內(nèi)炎癥反應(yīng)細(xì)胞的激活，和細(xì)胞因子的大量表達(dá)，從而造成腦損傷。而大量的研究表明n-

2、3 長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFAs）特別是二十二碳六烯酸（docosapentaenoic acid，DHA），不僅在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，損傷修復(fù)中具有保護(hù)作用，而且他們本身以及其代謝產(chǎn)物還具有顯著的抗炎作用。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)態(tài)觀察宮內(nèi)炎癥暴露后仔鼠腦組織內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和MyD88，IL-1β的表達(dá)變化，對(duì)比觀察DHA干預(yù)后以上檢測(cè)指標(biāo)的變化，探討DHA對(duì)圍產(chǎn)期炎癥暴露仔鼠腦組織炎癥狀態(tài)的

3、影響。
　　 方法：將開(kāi)始懷孕的SD大鼠隨機(jī)分為3組：1)LPS+DHA(實(shí)驗(yàn)組)：孕期第1d開(kāi)始給予DHA140mg/kg 灌胃至分娩。于孕第17，18d 連續(xù)兩次腹腔注射LPS，計(jì)量為350μg/kg。2）LPS組（模型組）：無(wú)菌生理鹽水灌胃，孕第17，18d 連續(xù)兩次腹腔注射LPS，計(jì)量同上。3）對(duì)照組：無(wú)菌生理鹽水灌胃，于孕第17，18d 腹腔注射無(wú)菌生理鹽水0.6ml。取各組孕21d，生后第1,7，14d的胎鼠及乳鼠，

4、分別記作G21，P1，P7，P14，隨機(jī)分為兩部分，其中一部分4％多聚甲醛灌注固定，取出腦組織再用4％多聚甲醛浸泡24h后石蠟包埋、切片。用HE染色法觀察不同時(shí)間點(diǎn)腦組織的病理改變，用免疫組化方法檢測(cè)腦組織中OX42 陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)情況。另一部分?jǐn)囝^取腦，迅速放入液氮罐中過(guò)夜，然后移入-80 ℃冰箱短期保存?zhèn)溆?。用Q-RT-PCR和Western-blotting 方法檢測(cè)腦組織中細(xì)胞因子IL-1 β的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水

5、平，用Q-RT-PCR 方法檢測(cè)MyD88 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。另收取各組新生鼠相應(yīng)的胎盤(pán)用4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色，觀察其病理改變。
　　 結(jié)果：三組孕鼠均能正常生活和飲食。LPS 腹腔注射后，模型組孕鼠有4 只出現(xiàn)陰道流血，其中1只孕鼠死亡，1只流產(chǎn),2只孕鼠早產(chǎn)并且產(chǎn)出部分死亡仔鼠。實(shí)驗(yàn)組有1 只流產(chǎn)，空白對(duì)照組無(wú)早產(chǎn)和流產(chǎn)。模型組胎盤(pán)間質(zhì)明顯增生變厚，管腔縮窄，血供減少，并可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，實(shí)驗(yàn)組胎

6、盤(pán)HE 切片炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)較模型組明顯減輕，血供尚豐富，胎盤(pán)間質(zhì)增生不明顯。腦組織HE 切片觀察，模型組腦白質(zhì)早期可見(jiàn)水腫和形態(tài)較幼稚的細(xì)胞，甚至伴有局灶性出血，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)模型組腦白質(zhì)內(nèi)神經(jīng)纖維走向紊亂，組織疏松，細(xì)胞數(shù)減少，多為體積小，突起少，核小、核仁不清的分化不良細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組早期腦白質(zhì)可見(jiàn)較多水腫細(xì)胞，無(wú)明顯出血灶和軟化灶，P14 時(shí)與對(duì)照組形態(tài)接近。與對(duì)照組相比：1）模型組IL-1 βmRNA表達(dá)水平持續(xù)升高直到P14，而實(shí)驗(yàn)

7、組到P7(p<0.05)，但表達(dá)水平較模型組明顯低(p<0.05)。2)模型組IL-1 β蛋白表達(dá)水平持續(xù)升高直到P14(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組P7、P14 升高不明顯。3）MyD88 mRNA表達(dá)水平在G21，P1 時(shí)實(shí)驗(yàn)組和模型組均明顯升高(p<0.05)，但在P7及P14 三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。4）小膠質(zhì)細(xì)胞OX42 陽(yáng)性表達(dá)在P14 時(shí)模型組仍較高(p<0.05)，但實(shí)驗(yàn)組表達(dá)低與對(duì)照組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0