鞘內(nèi)注射布美他尼對大鼠急性疼痛行為及鈉鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　疼痛通常是由于各種傷害性刺激所引發(fā)，如各種物理性及化學(xué)性因素均可成為傷害性刺激而導(dǎo)致疼痛的發(fā)生。在組織細(xì)胞損傷或炎癥狀態(tài)下，相關(guān)細(xì)胞因子及活性物質(zhì)釋放增多，如白介素1（IL-1）、鉀離子、5-羥色胺、乙酰膽堿、緩激肽、組胺等等，通過作用于傷害性感受器而激發(fā)疼痛反應(yīng)。作為傷害性感受器，在全身皮膚及各類組織中分化程度最低的游離神經(jīng)末梢能將各種形式的傷害性刺激轉(zhuǎn)換成一定編碼型式的神經(jīng)沖動(dòng)，沿著慢傳導(dǎo)的直徑較細(xì)的有髓

2、鞘（Aδ纖維）和最細(xì)的無髓鞘傳入神經(jīng)纖維（C纖維），經(jīng)背根神經(jīng)節(jié)傳到脊髓后角，再經(jīng)由對側(cè)的腹外側(cè)索傳至較高級的疼痛中樞—丘腦、其他腦區(qū)以及大腦皮質(zhì)，引起疼痛的感覺和反應(yīng)。
　　術(shù)后疼痛的機(jī)制獨(dú)特而復(fù)雜，術(shù)后疼痛過敏的形成與疼痛的外周敏化及中樞敏化有著密切的關(guān)系。炎癥因子通過相應(yīng)的離子通道、受體作用于外周傷害感受器，使傷害性感受器興奮性及敏感性發(fā)生改變而產(chǎn)生外周痛覺敏化。而在外周敏化及持續(xù)傷害性刺激下，通過激活基因表達(dá)等多種機(jī)制導(dǎo)致

3、脊髓背角和大腦中樞產(chǎn)生中樞性敏化。
　　既往痛覺過敏相關(guān)研究多著重于受體-遞質(zhì)的阻斷、信號傳入及興奮性神經(jīng)元功能上調(diào)等方面。從所周知，γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric，GABA)與甘氨酸（Glycine，Gly）受體功能在疼痛的傳遞與抑制中起重要作用，氯離子通道作為影響GABA與Gly受體功能的關(guān)鍵因素越來越受到關(guān)注，并被學(xué)者認(rèn)為將可能成為疼痛治療的新靶點(diǎn)。鈉鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（NKCC1）是神經(jīng)組織中氯離子平衡的主要調(diào)

4、控蛋白之一，目前已成為疼痛機(jī)制研究的熱點(diǎn)。
　　目前，在辣椒素致痛模型、福爾馬林致痛模型及關(guān)節(jié)炎模型中均已證實(shí)NKCC1在疼痛信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。對于急性創(chuàng)傷性疼痛形成及持續(xù)過程中NKCC1的表達(dá)及作用如何，目前報(bào)導(dǎo)較少。因此，本實(shí)驗(yàn)擬利用大鼠切口痛模型，通過鞘內(nèi)注射選擇性NKCC1抑制劑布美他尼，觀察其對大鼠術(shù)后疼痛行為及脊髓背根神經(jīng)節(jié)（DRG）NKCC1表達(dá)的影響，評估鞘內(nèi)注射布美他尼對大鼠術(shù)后痛覺過敏形成的作用，并探討其可

5、能機(jī)制，為臨床研究及應(yīng)用提供理論參考。
　　方法：
　　成年雄性SD大鼠135只(由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重250g～300g，清潔級。隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組（n=27）、注藥組（n=36）、手術(shù)組（n=36）及實(shí)驗(yàn)組（n=36）。對照組不作任何處理；注藥組鞘內(nèi)注射布美他尼100μg（20μl）；手術(shù)組行右足底切開手術(shù)；實(shí)驗(yàn)組先鞘內(nèi)注射布美他尼100μg后行右足底切開手術(shù)。采用熱輻射法（熱痛敏）、von Frey細(xì)絲法

6、（機(jī)械痛敏）及疼痛累計(jì)評分法（疼痛保護(hù)反應(yīng)）觀察與記錄術(shù)前、術(shù)后2h、4h、6h大鼠的行為學(xué)改變，采用免疫組化，熒光顯微鏡觀察各組術(shù)后2h、4h、6h背根神經(jīng)節(jié)（DRG）的NKCC1表達(dá)，并行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1．熱痛閾的變化各組基礎(chǔ)熱痛閾差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與對照組比較，注藥組大鼠在注藥后2h、4h的熱痛閾升高（P<0.05），手術(shù)組與實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的熱痛閾均降低（P<0.05）；與手術(shù)組比

7、較，實(shí)驗(yàn)組熱痛閾明顯高于手術(shù)組（P<0.05）。
　　2．機(jī)械痛閾的變化各組基礎(chǔ)機(jī)械痛閾差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與對照組比較，注藥組大鼠在注藥后2h的機(jī)械痛閾升高（P<0.05），手術(shù)組與實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)的機(jī)械痛閾均降低（P<0.05），但手術(shù)組大鼠的機(jī)械痛閾又明顯低于實(shí)驗(yàn)組（P<0.05）。
　　3．疼痛累計(jì)評分注藥組與對照組各觀察時(shí)間點(diǎn)的疼痛累計(jì)評分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與對照組比較，手術(shù)組與

8、實(shí)驗(yàn)組術(shù)后疼痛累計(jì)評分均升高（P<0.05），但手術(shù)組又明顯高于實(shí)驗(yàn)組（P<0.05）。
　　4．NKCC1陽性細(xì)胞表達(dá)的變化與對照組比較，注藥組在各時(shí)間點(diǎn)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），手術(shù)組及實(shí)驗(yàn)組在各時(shí)間點(diǎn)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯增多（P<0.01）；組間比較，實(shí)驗(yàn)組的陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)又明顯少于手術(shù)組（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.鞘內(nèi)注射布美他尼能提高切口痛模型大鼠的熱痛閾值。
　　2.鞘內(nèi)注