消癰生肌法治療消化性潰瘍的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、目的：
　　 本課題旨在探求中藥消癰生肌法治療消化性潰瘍的療效，通過(guò)對(duì)胃潰瘍大鼠治療后在病理組織學(xué)、分子生物學(xué)、血清學(xué)等方面研究對(duì)比，以及本方在消化性潰瘍患者中的療效觀察，探索本方治療消化性潰瘍的作用機(jī)制及對(duì)臨床應(yīng)用的價(jià)值。
　　 材料與方法：
　　 1、材料
　　 1.1研究對(duì)象
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：SPF級(jí)SD雄性大鼠70只，體重（200±10）g，隨機(jī)將大鼠分為7組，即正常對(duì)照組、假手術(shù)組、模型

2、組、消癰潰得康組、中藥湯劑組、潰瘍膠囊組、奧美拉唑組，每組10只。
　　 臨床實(shí)驗(yàn)：待檢胃粘膜標(biāo)本來(lái)自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院胃鏡室，胃鏡活檢組織保存于液氮中待用，其中胃潰瘍10例，慢性糜爛性胃炎10例，慢性淺表性胃炎9例。
　　 臨床觀察：病例均為2007年2月至2008年10月符合入選標(biāo)準(zhǔn)的本院門(mén)診患者，共60例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為2組。治療組30例，對(duì)照組30例。
　　 1.2藥物與試劑
　　 消癰生

3、肌方，消癰潰得康，潰瘍膠囊，奧美拉唑鎂腸溶片，三葉因子2上下游引物，西咪替丁片。
　　 100％冰乙酸，10％水合氯醛溶液，10％甲醛溶液，IL-1β，IL-2 ELIASA酶免疫試劑盒；抑肽酶；NO，NOS試劑盒；焦碳酸二乙酯（DEPC）；瓊脂糖；嗅化乙錠（EB）； TRIZOL液；異丙醇；氯仿；DNA-marker DL2000； RT-PCR試劑盒；100％乙醇。
　　 1.3主要實(shí)驗(yàn)儀器
　　 電熱恒溫水

4、溫箱，恒溫震蕩器， TDL-5A臺(tái)式離心機(jī)，721B分光光度計(jì)， Leica RM2135切片機(jī)：Olympus光學(xué)顯微鏡；1601紫外分光光度計(jì)；INFINITE M200酶標(biāo)儀；SN-682型放射免疫r計(jì)數(shù)器；游標(biāo)卡尺；Milli-Q超純水機(jī)；DY89-Ⅰ電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)；JY92-Ⅱ超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)；DU-600蛋白核酸分析儀；BIOFUGE28RS低溫高速離心機(jī)；Indeslt低溫冰箱；PE9600 PCR儀；EPS-300電泳儀

5、；DYCP-33A電泳槽。
　　 2、方法
　　 2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分
　　 將傳統(tǒng)冰乙酸燒灼法加以改良，制備大鼠胃潰瘍模型。普通人按體重60kg計(jì)算，人與200g體重大鼠折算比為6.25：1，計(jì)算出每種藥物的對(duì)應(yīng)濃度：消癰生肌方1．28g/kg，消癰潰得康0.2 g/kg，潰瘍膠囊0.018 g/kg，奧美拉唑腸溶片0.2 mg/kg。
　　 各組實(shí)驗(yàn)大鼠從造模后第2天開(kāi)始灌胃，早晚各一次，共12天。正常

6、組，正常飼養(yǎng)，不進(jìn)行灌胃；假手術(shù)組、模型組，每日灌胃蒸餾水2ml，早晚各一次；湯藥組，每日灌胃1．28g/kg濃度的消癰生肌方溶液2ml，早晚各一次；潰得康組，每日灌胃0.2g/kg濃度的消癰潰得康溶液2ml，早晚各一次；膠囊組，每日灌胃0.018g/kg濃度的潰瘍膠囊溶液2ml，早晚各一次；奧美組，每日早晨灌胃1.28g/kg濃度的奧美拉唑腸溶片溶液2ml，晚上灌胃蒸餾水2ml。
　　 灌胃12天，禁食一晚后取材。各組大鼠用1

7、0％水合氯醛麻醉，開(kāi)腹，找到胃，在幽門(mén)、賁門(mén)兩端剪斷，將胃取出，取胃液；沿胃大彎剪開(kāi)，用生理鹽水清洗，在潔凈工作臺(tái)將胃壁展平，觀察潰瘍情況，然后沿潰瘍邊緣3mm切下胃壁，制作HE染色的病理切片。撥開(kāi)腸管、網(wǎng)膜找到腹主動(dòng)脈，用頭皮針刺入，取血約5ml，每ml血中加入抑肽酶10μl，混勻，涼置2小時(shí)；再以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上部血清，裝入EP管中，按組別1-70編號(hào)標(biāo)記，冷凍備用。
　　 觀測(cè)指標(biāo)：胃黏膜大體形態(tài)觀察、潰

8、瘍面積的測(cè)定、胃液PH值測(cè)定、胃黏膜病理組織檢查，ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL-1β，IL-2，硝酸還原法測(cè)定NO含量，比色法測(cè)定血清中NOS水平。
　　 2.2臨床部分
　　 將各組患者胃粘膜標(biāo)本加入1ml TRIZOL試劑，用組織剪剪碎，用細(xì)胞粉碎機(jī)破碎，做總RNA的提取，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，PCR反應(yīng)，瓊脂糖電泳，得出TFF2的反應(yīng)條帶。
　　 治療組予消癰生肌方治療。每天1劑，水煎，取汁300mL，分3次口服。對(duì)

9、照組予胃熱清膠囊治療。每次4粒，每日3次。兩組均治療2月為1療程，同時(shí)加服西咪替丁200mg，每日三次口服。治療期間停用其他藥物，并避免進(jìn)食粗糙、辛辣等刺激性食物，戒煙酒。主要觀察臨床癥狀及纖維胃鏡改變、復(fù)發(fā)率及不良反應(yīng)。
　　 結(jié)果：
　　 1．模型組潰瘍面積明顯大于正常組和假手術(shù)組（P<0.01），但各組與正常組間仍有差異（P<0.01）；膠囊組、奧美組與模型組比較有顯著性差異（P<0.01），湯藥組和潰得康組的潰瘍

10、面積明顯小于奧美組和膠囊組，湯藥組與其它各對(duì)照組存在著差異（P<0.05）。湯藥組與奧美組的胃酸值比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）
　　 2．湯藥組中IL-1β含量高于正常組、假手術(shù)組，與之比較有非常顯著性差異（P<0.01）；湯藥組中IL-1β含量低于潰得康組、膠囊組、奧美組，與之比較有非常顯著差異（P<0.01）；模型組含量最高，各組與之比較均有非常顯著性差異（P<0.01）：潰得康組與奧美組比較，無(wú)顯著差異（P>0.05）

11、。湯藥組中IL-2含量低于正常組、假手術(shù)組，與之比較有非常顯著性差異（P<0.01）；湯藥組中IL-2含量高于潰得康組、膠囊組、奧美組，與之比較有非常顯著差異（P<0.01）；模型組含量最低，各組與之比較均有非常顯著性差異（P<0.01）；潰得康組與奧美組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3．本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，湯藥組NO含量明顯高于模型組，也高于膠囊組，低于正常組和假手術(shù)組；潰得康組與湯藥組比較，略高于后者；奧美組NO含

12、量高于各治療組，甚至高于正常組和假手術(shù)組；膠囊組的NO含量?jī)H高于模型組，低于其它各組。湯藥組的NOS活力均高于各對(duì)照組，潰得康組次之，且明顯高于模型組；正常組和假手術(shù)組NOS活性最高。
　　 4．每個(gè)病例胃黏膜TFF2均有表達(dá)，淺表性胃炎組表達(dá)較強(qiáng)，糜爛性胃炎組次之，而胃潰瘍組表達(dá)最弱。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，潰瘍組TFF2表達(dá)低于另兩組，與糜爛組比較有非常顯著性差異（P<0.01），與淺表組比較也有非常顯著性差異（P<0.01）；糜爛組

13、與淺表組比較有顯著性差異（P<0.05），均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5．本觀察表明，消癰生肌方治療胃毒熱證消化性潰瘍療效較好，優(yōu)于對(duì)照組的療效，且復(fù)發(fā)率低，半年僅復(fù)發(fā)一例，在用藥過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)有心、肝、腎等重要器官及造血系統(tǒng)的毒性損害。
　　 結(jié)論：
　　 1．消癰生肌方能使大鼠實(shí)驗(yàn)性潰瘍面積縮小，促使胃黏膜上皮細(xì)胞增殖，使肉芽組織的迅速生成，促進(jìn)潰瘍愈合，能夠通過(guò)降低胃液酸度，減輕攻擊因素對(duì)胃黏膜的損傷，由此我們認(rèn)

14、為消癰生肌方也具有較強(qiáng)的抑酸能力。
　　 2．消癰生肌方能夠通過(guò)降低和提高大鼠血清中IL-1β，IL-2水平，緩解炎癥介質(zhì)釋放、降低炎癥反應(yīng)、增強(qiáng)胃粘膜的防御功能，以此來(lái)促進(jìn)潰瘍的愈合。
　　 3．消癰生肌方能有效增強(qiáng)NOS活性，調(diào)節(jié)局部血流，適度提高NO的生成，使之接近正常水平，調(diào)節(jié)胃酸分泌，維護(hù)胃黏膜的完整性和防御功能，調(diào)節(jié)胃腸黏膜血流量，從而達(dá)到促進(jìn)潰瘍愈合的目的。
　　 4．三葉因子2在胃潰瘍黏膜組織中表